[发明专利]一种接种大量液体标本的固体培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种接种大量液体标本的固体培养基及培养方法，属于微生物培养技术领域。

背景技术

微生物培养方法因培养基不同分为固体培养方法和液体培养方法；其中，常用的培养基为固体培养基和液体培养基。固体培养基为固体形态，微生物在培养基表面进行生长，广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。液体培养基因营养物质分布均匀，与微生物表面接触充分，能大量溶解微生物的代谢产物，还可以接种大量的标本，培养的微生物阳性率高；但是液体培养基不易定量和分离细菌，所以液体培养基广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的生产。

固体培养和液体培养各有优缺点，在实际应用中根据不同的需要进行选择或相互补充，配合使用。在微生物实验室的工作中会有大量液体标本微生物检测，如医学上的临床血液细菌检测或鉴定、生活或环境中食品、药品、水和物体表面的细菌检测。在进行大量液体标本微生物检测时，首先需要在液体培养基中进行培养使细菌增殖，之后再将增殖后的细菌接种到固体培养基上，最后在固体培养基上进行分离、鉴定和观察。通过上述方法，有效地利用了液体培养基在液体环境中营养物质分配均匀、促使微生物快速增殖、阳性率高的优点，但是因为液体培养基不易于进行分离、鉴定和观察，所以不得不接种到固体培养基上进一步进行后续的检测，最终导致上述接种的方法比较复杂，培养时间较长。

但是在实际应用中，如果直接将大量液体标本接种到现有的琼脂培养基上，虽然标准的琼脂固体培养基也能吸收少量液体，但由于琼脂固体培养基已经大量吸水膨胀，再吸收液体的能力很小，通常小于起始凝胶体积的5％，琼脂培养基中会存在大量的液体，微生物在大量的液体中不易于和固体培养基表面接触，不能很好地利用固体培养基上的营养物质，从而影响了微生物的生长、增殖和分离，最终导致检测结果的精确度降低。

发明内容

为此，本发明解决了现有技术中大量液体标本先进行液体培养再进行固体培养的方法中整个过程时间较长、操作较繁琐、时效性差的问题，进而提供了一种可适用于大量液体标本直接培养、便于分离、计数和观察、时效性强、操作简单的固体培养基及培养方法。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种固体培养基，具有培养层，所述培养层至少包含液体标本吸附层；所述液体标本吸附层为吸水膜层、和/或吸水粉层。

上述固体培养基中，在所述液体标本吸附层的表面或者底面设置有琼脂培养基层。

上述固体培养基中，所述琼脂培养基为营养性培养基、选择性培养基或鉴定性琼脂培养基。

上述固体培养基中，所述液体标本吸附层厚度为1-4mm。

上述固体培养基中，所述吸水膜层或吸水粉层包含高吸水性材料。

上述固体培养基中，所述高吸水性材料为魔芋胶、明胶、黄原胶、瓜豆胶、琼脂、琼脂糖、壳多糖、角叉菜胶、聚丙烯酸盐、聚乙烯酸盐、膨润土、藻酸盐、胶原蛋白、熔融的硅酸盐、水溶性淀粉、改性纤维素、聚乙二醇、聚氧乙烯、聚乙烯醇、葡聚糖、聚丙烯酰胺中的一种或几种。

上述固体培养基中，所述吸水层还含有微生物生长所需营养物质、微生物生长调节剂、溶血剂、裂解剂、抗生素中和剂、细菌选择生长剂中的一种或几种。

其中，所述溶血剂或裂解剂使标本中血细胞或其它人体组织物质溶解或裂解，便于水分的吸收。常用的溶血剂为：皂素、毛地黄皂苷、吐温、月桂酸单甘酯或其他表面活性剂；裂解剂可为蛋白酶。

微生物生长调节剂可以为细菌的各种生长因子，例如：胰蛋白胨、大豆胨、蛋白胨、麦芽提取物、葡萄糖、氯化血红素、胱氨酸、二硫化物、甲萘醌、辅酶I。

抗生素中和剂可以祛除标本中抗生素对细菌培养的影响，提高和/或加快测试样品中微生物的培养。例如：各种树脂、树胶、碳基材料(如活性炭)、抗生素降解酶(如β-内酰胺酶)。

细菌选择生长剂，在进行选择培养时选择加入：如大肠杆菌可加入乳糖、胆盐、K₂HPO₄、MgSO₄、硫酸镁、二硫化物、SDS；真菌和其他耐酸微生物，可加入：葡萄糖、酵母提取物、NHSiCl₄，柠檬酸或酒石酸。

上述固体培养基中，还含有微孔膜层，微孔膜层位于所述固体培养基的最上层，所述微孔膜层为纤维素膜、再生纤维素膜、超细玻璃纤维滤膜、聚氯乙烯膜或聚四氟乙烯膜。

一种大量液体标本微生物的培养方法，其包括以下步骤：

(1)用高吸水性材料制备吸水膜层、吸水粉层或吸水膜层和吸水粉层的结合层，然后得到液体标本吸附层；