[发明专利]小槐花总黄酮提取物的制备及质量检测方法

权利要求书

1.一种小槐花总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述的小槐花总黄酮提取物的制备方法包括以下步骤：

（1）取小槐花干燥药材，粉碎，按重量加入9-13 倍量体积浓度为60% 的乙醇；

（2）加热回流提取2 次，每次2-3 小时，提取液滤过，合并滤液；

（3）滤液回收乙醇，浓缩得浓缩液，浓缩液: 原药材的质量比为1.7:1-2.3:1，浓缩液过聚酰胺柱分离, 聚酰胺柱中聚酰胺的体积与浓缩液的体积比为1:1，然后先用聚酰胺体积3-5 倍量的20-40% 的乙醇洗脱，弃去20-40% 乙醇洗脱液，再用聚酰胺体积5-7 倍量的65-85% 乙醇洗脱，收集65-85% 乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得小槐花总黄酮粗品；

（4）将步骤（3）中得到的小槐花总黄酮粗品加甲醇溶解，然后加入小槐花总黄酮粗品总重1-1.5 倍的硅胶拌样，干燥，拌样后样品备用；取小槐花总黄酮粗品总重80-120 倍的柱层析硅胶以乙酸乙酯为溶剂湿法装柱，取拌样后样品加乙酸乙酯湿法上样，先采用乙酸乙酯洗脱, 乙酸乙酯: 柱层析硅胶的质量比为4:1-6:1、再用体积比为1:1 的乙酸乙酯- 甲醇洗脱，乙酸乙酯- 甲醇: 柱层析硅胶的质量比为7:1-10:1，分段收集洗脱液，每份洗脱液：原药材的质量比为1:1.5-1:2.5，洗脱液采用薄层色谱检视，合并检视到有黄酮类成分的洗脱液，回收溶剂，干燥，即得小槐花总黄酮提取物。

2.如权利要求1 所述的小槐花总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述的小槐花总黄酮提取物中总黄酮的含量测定包括以下步骤：

（1）仪器与试剂：

仪器：紫外- 可见分光光度仪

试剂：芦丁对照品，甲醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠；

(2) 溶液制备

A、对照品贮备液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1mL 含O.2mg 的溶液，即得；

B、标准曲线的绘制：分别准确吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于25ml 量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6min ；加10％硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置6min ；加4％氢氧化钠溶液10.0ml，再加水至刻度，混匀，放置15min，摇匀；于500nm 波长处测定吸收度，以对照品吸收度值A 对浓度C 进行线性回归，得回归方程：A=10.829C+0.6728 ；

C、供试品溶液制备：精密称取样品30mg，置50mL 量瓶中，加甲醇40ml，超声使之溶解，冷却至室温，以甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得；

D、空白溶液制备：以相应溶液作为空白；

（3）样品测定

精密吸取供试品溶液2mL，置25mL 量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6min ；加10％硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置6min ；加4％氢氧化钠溶液10.0ml，再加水至刻度，混匀，放置15min，摇匀；用紫外- 可见分光光度仪于500nm 波长处测定吸收度, 总黄酮含量以芦丁计算；

（4）结果计算

从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量，本发明小槐花总黄酮提取物中总黄酮含量以芦丁计算不少于50%。

3.如权利要求1 所述的小槐花总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述的小槐花总黄酮提取物中异柠檬酚的HPLC 法含量测定包括以下步骤：

（1）仪器与试剂：

仪器：高效液相色谱仪LC-20A ；SPD-M20A 二极管阵列检测器；SIL-20A 自动进样器；

CTO-20A 柱温箱；LC solution 工作站；XS205DU 电子天平；数控超声波清洗器KQ-500DB，分析天平XS205 ；

试剂：异柠檬酚对照品，甲醇，磷酸；

（2）溶液制备

A、对照品溶液的制备：准确称取异柠檬酚对照品4.5mg，置于10ml 容量瓶中，加甲醇至近刻度，超声使之溶解，冷却至室温，以甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为450μg／ml 的异柠檬酚对照品贮备溶液；取异柠檬酚对照品贮备溶液2ml，置于10ml 容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为90μg／ml 的异柠檬酚对照品溶液；

B、供试品溶液制备：精密称取样品0.1g，置10mL 量瓶中，加甲醇至近刻度，超声使之溶解，冷却至室温，以甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得；

（3）样品测定

用高效液相色谱仪LC-20A 来测定对照品及样品，色谱条件为：采用ZORBAX EclipseXBD-C18，250 mm×4.6 mm，5 μm色谱柱，流动相为甲醇-0.2％磷酸水溶液，流速为1.0 mL/min，检测波长为270 nm，柱温为35℃，进样量为10μL，理论塔板数按异柠檬酚计不低于3000；

（4）结果计算

根据得到的对照品及样品的色谱图，记录峰面积，采用外标法计算含量；小槐花总黄酮提取物中异柠檬酚的含量不少于5mg/g。