[发明专利]一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法

权利要求书

1.一种重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，包括三类质粒载体，一是含有全长基因组编码信息的cDNA转录质粒载体，二是组成RNP核心的辅助蛋白的蛋白表达质粒载体，三是RNA沉默抑制子蛋白的表达质粒载体；

所述的cDNA转录质粒载体包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白；

所述的RNP核心的辅助蛋白的蛋白表达质粒载体包括N、P和L三种蛋白，这三种蛋白被同时插入同一个表达载体中，得到pGD-NPL；

所述的RNA沉默抑制子蛋白的表达质粒载体是由烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus, TEV) Hc-Pro基因、番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus, TBSV) P19基因和大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus, BSMV) γb基因所编码的RNA沉默抑制子被分别插入pGD载体，得到的三个表达载体：pGD-Hc-Pro、pGD-P19和pGD-γb；

所述的重组植物弹状病毒是苦苣菜黄网病毒(sonchus yellow net virus，SYNV)。

2.如权利要求1的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，所述异源核酸序列编码绿色荧光蛋白，或编码绿色荧光蛋白与b半乳糖苷酶融合蛋白。

3.如权利要求1的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，其中所述异源核酸序列是来源于动物病毒的抗原蛋白。

4.如权利要求1所述的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，所述的异源核酸序列以独立的转录单元插入苦苣菜黄网病毒的基因间隔区。

5.如权利要求1所述的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，所述的苦苣菜黄网病毒是糖蛋白基因的缺失体，而且其中所述的异源核酸序列插入到原糖蛋白基因编码框。

6.如权利要求1所述的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，编码所述苦苣菜黄网病毒的反基因组的分离核酸分子是一个或一个以上基因组或反基因组源的嵌合体。

7.如权利要求1所述的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，可侵染植物寄主，包括苦苣菜（Sonchus oleraceus）、莴苣（Lactuca sativa）、本氏烟（Nicotiana benthamiana）、心叶烟（Nicotiana glutinosa）。

8.如权利要求1所述的重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，所述的重组植物弹状病毒载体可在植物细胞内表达并生产异源插入核酸序列编码的多肽。

9.一种构建如权利要求1-8任一项所述的重组植物弹状病毒载体系统的方法。