[发明专利]一种抗生素及其制备和应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种抗生素，特别涉及一种利用壮观链霉菌发酵生产的曲张链丝菌素。

(二)背景技术

壮观链霉菌(Streptomyces spectabilis)因产生非常壮观的红色而得名。在上世纪六十年代被发现产生一种广谱性氨基环醇类抗生素—大观霉素，大观霉素(Spectinomycin)，又名壮观霉素，其对多数的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有活性，并对由这些细菌引起的感染效果较好。在临床上对肺炎杆菌、流感杆菌、支原体均有较好的抑制作用，特别是对淋球菌的效果较佳，因此作为特效药用于治疗由淋球菌引起的尿路感染、尿道炎、子宫颈炎、直肠炎等疾病。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种新的作用于革兰氏阳性菌的抗生素—曲张链丝菌素，以及曲张链丝菌素的制备方法及抑制革兰氏阳性菌活性的应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种抗生素，所述抗生素为曲张链丝菌素D或曲张链丝菌素A，所述曲张链丝菌素D分子式为C₄₀H₅₂NO₁₃，结构式为1所示，曲张链丝菌素A分子式为C₄₂H₅₃NO₁₆，结构式为2所示；

本发明还涉及一种所述抗生素的制备方法，所述方法为：

(1)抗生素生物发酵种子培养：将壮观链霉菌zgd-Q(CCTCC NO:M2012328)接至种子培养基中培养，种子培养时培养基装液量为30mL～50mL/250mL的三角瓶，培养温度为28～30℃，摇瓶转速为180～220rpm，培养时间42h，获得种子培养液；

种子培养基：葡萄糖(或糊精、玉米浆、可溶性淀粉)1.0％，鱼粉(或棉子粉、花生粉、豆饼粉)0.5％，酵母粉1.0％，蛋白胨0.2％，用NaOH调节pH至7.2-8.0，溶剂为水，115℃灭菌30min，备用；

上述百分比浓度为质量体积百分比，即某组分浓度1％表示100mL培养基中含有1g该物质，下同；

(2)抗生素生物发酵液体深层发酵培养：将种子培养液接至液体发酵培养基中培养，发酵培养基装液量为30mL～50mL/250mL的三角瓶，接种量体积比V/V，10％～15％，培养温度为28～30℃，摇瓶转速为180～220rpm，培养时间为96h，获得含抗生素的发酵液；

发酵培养基：可溶性淀粉4.0～8.0％，糊精(或葡萄糖)1.5～5.0％，豆饼粉(或黄豆粉)1.0～5.0％，玉米浆0.5～3.0％，酵母粉2.0～5.0％，CaCl₂0.0～2.0％，KH₂PO₄0.0～0.7％，KCl 0.0～0.5％，CaCO₃0.2～1.0％，甘氨酸(Gly)0～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0～0.2g/L，尿素0～2.6g/L，FeSO₄·7H₂O 0～0.2mg/L，CuSO₄·5H₂O 0～20μg/L，H₃BO₃0～20μg/L，CoCl₂·6H₂O 0～2mg/L，Na₂MoO₄0～20μg/L，MnSO₄0～20μg/L，ZnSO₄·7H₂O 0～200μg/L，生物素0～2μg/L，pH为7.2～7.8，溶剂为水，灭菌，备用。

(3)本发明的抗生素的分离、纯化

上述含抗生素的发酵液8000r/min离心20min去除发酵液中固形物，利用旋转蒸发仪对上清液浓缩至膏状，浓缩后用大量的乙酸乙酯萃取，萃取粗提物用大孔吸附树脂(优选AB-8大孔吸附树脂)除去色素类物质后，然后用乙醇水溶液梯度洗脱后获得5个组分：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，采用生物自显影方法跟踪抑菌组分(采用常规管碟法，以藤黄八叠球菌为指示菌对活性物质进行跟踪)，发现Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分抑菌活性较强；采用RP-18柱色谱分离Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分，分别获得S1、S2两个具有很强抑菌活性的组分，对S1、S2进行HPLC半制备，最后获得化合物1和2。