[发明专利]一种可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法

权利要求书

1.一种可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）DNAzyme功能化磁珠储备液的制备；

（2）固定有连接探针的纳米金悬浮溶液的制备：将5 μL 10 ppm金纳米粒子和5 μL 10 μM连接探针DNA，其序列为5’-biotin-AAA AAT AGT GAG TT-3’，加入到40 μL PBS缓冲液中，混匀后在37 ℃下恒温振荡1 h，制得连接探针修饰的纳米金悬浮溶液，0-4℃存储备用；

（3）辣根过氧化物酶修饰的信号探针溶液的制备：将2.5 μL 10 μM信号探针5’-biotin-ATATAT TGT CCG TGC TAG AAG GAA CTC ACT AT-3’和2.5 μL 0.02 mg/mL 辣根过氧化物酶溶液加入到25 μL PBS缓冲液中，混匀后，在37 ℃下恒温振荡30 min，制得辣根过氧化物酶修饰信号探针溶液，0-4℃存储备用；

（4）实际水样中痕量UO₂²⁺的可视化检测：取10 μL的实际水样与步骤（1）制备的50 μL DNAzyme功能化磁珠储备液混匀，室温下振荡1 h；在磁铁作用下分离磁珠后，用100 μL PBS缓冲液洗涤3次，随后加入50 μL步骤（2）制备的固定有连接探针的纳米金悬浮溶液，混匀后，在37 ℃下恒温振荡1 h，得到连接有纳米金的磁珠悬浮液；在磁铁作用下分离磁珠后，用100 μL的PBS缓冲液洗涤3次，加入30 μL步骤（3）制备的辣根过氧化物酶修饰的信号探针溶液，混匀后，在37 ℃下恒温振荡30 min；在磁铁作用下，用100 μL的PBS缓冲液清洗5次后，加入300 μL 四甲基联苯胺/H₂O₂溶液，振摇20 min后通过裸眼观测混合溶液颜色变化或应用紫外分光光度计测试溶液的吸光度对UO₂²⁺进行半定量及定量快速检测。

2.根据权利要求1所述的可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：步骤（1）具体为：在50 μL DNAzyme溶液中，加入10 μL 1 mg/mL磁珠分散液，混合均匀；混合溶液在37 ℃下恒温振荡30 min使DNAzyme均匀地固定在磁珠表面；用磁铁分离固定有DNAzyme的磁珠，并用100 μL MES杂交缓冲液清洗3次后，把固定有DNAzyme的磁珠分散在50 μL MES杂交缓冲液中，0-4℃存储备用。

3.根据权利要求2所述的可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：所述的DNAzyme溶液的制备方法为：取 2.0 μL 0.18 μM 的底物链DNA，序列为：5’-biotin-ATATAT TGT CCG TGC TAG AAG GAA CTC ACT AT rA GGA AGA GAT GGA CGT G-3’和2.0 μL 0.36 μM 酶链DNA，序列为：5’-CAC GTC CAT CTC TGC AGT CGG GTA GTT AAA CCG ACC TTC AGA CAT AGT GAG T-3’，混合于46 μL的 MES杂交缓冲液中，升温至85 ℃反应2 min后，以1 ℃/min的速度冷却至室温，得到双链DNAzyme溶液。

4.根据权利要求3所述的可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：所述的MES杂交缓冲液为：50 mM MES，300 mM NaNO₃，pH=5.5。

5.根据权利要求1所述的可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：步骤（4）所述的PBS缓冲液为：10 mM、pH=7.4。