[发明专利]一种崖柏组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种崖柏组培快繁方法。

背景技术

崖柏（Thuja sutchuenensis Franch.）为柏科（Cupressaceae）崖柏属（Thuja L.）常绿乔木，树高可达20ｍ，胸径2ｍ以上，在白垩纪繁盛一时，被世界自然保护联盟（IUCN）公布为极危树种，是世界上仅存的植物活化石，也是我国特有的国宝级植物。由于该树种起源古老，材质优良，具有重要的艺术价值、收藏价值、药用价值和研究价值。1999 年，重庆林业局组织专家开展国家重点保护野生植物调查时，在重庆的城口县和开县山区发现该种的野生种群，但是数量有限，天然更新不良，种群处于极度衰退状态。2005年，在重庆花萼山发现较大的崖柏种群。2013年经市场崖柏疯炒后，又先后在河北、河南、山西、陕西、甘肃天水等地发现崖柏，并遭到疯狂的乱砍乱伐，崖柏正处于极度濒危状态，亟待进行拯救性繁育。

有关崖柏种群繁殖的研究较少，张世强等对崖柏种子繁育进行了研究；陈红锋等人发明了一种崖柏种子繁殖的方法；金江群等对崖柏扦插繁殖进行了研究。野外调查发现，崖柏的结实量极低且种子败育严重，种子缺乏已构成种子繁殖的主要障碍；扦插繁殖可以解决崖柏种子繁殖的种源稀缺问题，但易受母株数量限制，并且缺乏崖柏扦插繁殖的系统研究，存在扦插枝条用量大、繁殖率较低，植株容易老化的问题。而使用组织培养方法繁殖崖柏可以克服以上技术存才的不足，可以大量、快速扩大崖柏种群数量，因此研究崖柏组培快繁方法具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种崖柏组培快繁方法，以便扩大崖柏这一濒危物种的种群数量，同时为这一珍稀植物的研究和开发提供可靠的材料来源。其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体采集及消毒：选取崖柏春天萌发的嫩枝作为外植体，剪成5～6cm茎段，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡10～15min，在磁力搅拌器上旋转处理20min，自来水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒50s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面的水分备用；

（2）初代培养：将经步骤（1）消毒后的嫩枝剪成约1.5cm的茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养, 培养条件为：每天光照12～14小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；

（3）继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；

（4）生根培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm无根嫩梢从基部切下接种至生根培养基进行诱导生根，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度2500～3000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；

（5）炼苗移栽：将苗高6～10cm的壮苗带瓶移至温度25±1℃、湿度70～75%、光强4000～5000Lx环境下，2天后逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后洗去组培苗根系上的培养基，栽至铺有移栽专用基质的苗床中，温度16～22℃，空气相对湿度75％～80％，光照强度5000～10000Lx；

2.前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的初代培养基的组成为：GD+KT1.0～3.0mg/L+NAA0.5～0.8mg/L+6-BA4.0～6.0mg/L +AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；

3. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的继代培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+6-BA5.0～7.0mg/L+AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；

4. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的生根培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；

5. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的移栽专用基质由山土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成。

有益效果