[发明专利]分泌S100A9单克隆抗体的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用有效
申请号: | 201510375757.3 | 申请日: | 2015-06-29 |
公开(公告)号: | CN104894074B | 公开(公告)日: | 2017-12-19 |
发明(设计)人: | 刘文弟;张改平;张振强;宋军营;孙向东;段睿;米丹阳;赵书民;闫敏;张钟允 | 申请(专利权)人: | 河南中医药大学 |
主分类号: | C12N5/20 | 分类号: | C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577;G01N33/574 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 分泌 s100a9 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 及其 应用 | ||
技术领域
本发明涉及一种分泌S100A9单克隆抗体的杂交瘤细胞株,同时还涉及由该杂交瘤细胞株分泌产生的S100A9单克隆抗体,以及该单克隆抗体的应用,属于生物工程技术领域。
背景技术
S100A9是S100钙结合蛋白家族的一个重要成员,又称钙粒蛋白B(calgranulin B,CAGB)、骨髓相关蛋白-14(myeloid related protein of molecular weight 14kDa,MRP-14)、迁移抑制因子相关蛋白-14(migration inhibitory factor-related protein of molecular weight 14kDa,MRP-14)等。S100A9主要分布于脾脏、肺脏和皮肤等器官,表达于嗜中性粒细胞、单核细胞、角化细胞等的胞浆和细胞外液中,是一种与炎症、创伤、肿瘤关系密切的钙结合蛋白。S100A9结合Ca2+、Zn2+、花生四烯酸、角蛋白中间丝、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Toll-样受体4(TLR4)、基质金属蛋白酶(MMPs)等,具有细胞内、外调节活性,参与炎症反应和肿瘤发展过程。
近年来,研究发现S100A9与多种疾病相关,例如其在肿瘤及炎症组织中呈高表达,在急性和慢性炎症中扮演重要角色。S100A9蛋白的检测对研究多种疾病的发生、发展、治疗及预后均有指导意义,其潜在应用价值正逐渐突出,有可能成为这些疾病临床诊断的新指标。目前,S100A9相关抗体药物的研发已成为国内外研究的热点,例如开发在炎性疾病或癌症位点(如前列腺癌、皮肤癌、动脉粥样硬化等)阻止S100A9和/或其活动的治疗策略等。因此,获得表达量更多、亲和性更好、稀释度更高、特异性更好的S100A9单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株对临床诊断和科学研究具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种能稳定分泌S100A9单克隆抗体的杂交瘤细胞株,由该杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体滴度高、亲和性好、特异性强,单克隆抗体与S100A9重组蛋白特异性结合,与钙结合蛋白S100家族的S100A8、S100A12和S100A13均无交叉反应。
同时,本发明还提供一种由上述杂交瘤细胞株分泌产生的S100A9单克隆抗体。
最后,本发明还提供一种S100A9单克隆抗体的应用。
为了实现以上目的,本发明所采用的技术方案是:
分泌S100A9单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其名称为杂交瘤细胞ⅡD4B10,保藏编号:CGMCC No.10596,保藏日期:2015年05月14日,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
S100A9单克隆抗体,由上述杂交瘤细胞CGMCC No.10596分泌产生。
S100A9单克隆抗体的制备方法包括以下步骤:将分泌S100A9单克隆抗体的杂交瘤细胞CGMCC No.10596接种至小鼠腹腔,采集腹水,提取(纯化)抗体,即得。
S100A9单克隆抗体,包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码重链可变区氨基酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.3所示,编码轻链可变区氨基酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.4所示。
S100A9单克隆抗体的应用,包括单克隆抗体在免疫组化检测中的应用,如检测人乳腺癌、结肠癌、肝细胞性肝癌等癌症组织中S100A9蛋白的表达等。还包括利用单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列构建基因工程抗体。
基因工程抗体,包含如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
本发明的有益效果:
本发明应用人外周血白细胞为免疫原,免疫Balb/c小鼠,采用经典的细胞融合技术,通过免疫细胞化学对杂交瘤细胞进行阳性筛选,应用免疫沉淀-质谱法对单克隆杂交瘤细胞进行特异性鉴定,经Western Blot验证,获得一株能稳定分泌抗人S100A9蛋白的杂交瘤细胞株,其名称为杂交瘤细胞ⅡD4B10,保藏编号:CGMCC No.10596,保藏日期:2015年05月14日,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
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