[发明专利]含双油体蛋白与重组成纤维生长因子9融合蛋白的油体

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及含双油体蛋白与重组成纤维生长因子9融合蛋白的油体。

背景技术

成纤维细胞生长因子9(fibroblastgrowthfactor9，FGF9)是成纤维细胞生长因子家族(FGFs)的成员之一。广泛分布于人体各种组织中，它参与骨骼发育、血管形成、胚胎发育、损伤修复、细胞凋亡、神经再生、肿瘤生长等多种生理和病理的过程，可有效促进有丝分裂和细胞生长。FGF9最初发现于人类神经胶质瘤细胞系，具有神经胶原激活因子的活性，基于其活性最初被命名为胶质细胞激活因子(glia-activatingfactor，GAF)。FGF9是一种自分泌或旁分泌生长因子，在许多生理过程起着至关重要的作用，包括胚胎发育。人FGF9基因编码一个由207个氨基酸组成的蛋白质序列，分子质量约26kDa。FGF9主要分布于细胞和组织中，包括成骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、晶状体上皮细胞，皮肤、肝、肾脏、胃、生殖系统、淋巴组织等。研究发现，FGF9具有多种生物学活性，作为胞间信号分子它参了血管形成、胚胎发育、损伤修复、细胞凋亡、神经再生、肿瘤生长等多项生理和病理的过程，尤其是在卵巢癌发生、骨骼发育、神经再生、性腺分化等过程中起着重要的作用。因此，临床上应用FGF9对诊断卵巢癌、治疗软骨障碍、软骨发育不全以及性腺分化机理的研究，越来越受到人们的关注，同时如何进行高纯度、高产率的具有生物活性的FGF9的提取一直是广大研究者关注的课题。

人FGF9定位于第13号染色体短臂上(13qll-q12)，编码区含有627个脱氧核苷酸，共编码208个氨基酸；在FGF9的3′端非编码区(3′-UTR)存在一个潜在的多腺苷酸化位点；FGF9的5′端非编码区(5′-UTR)和外显子1具有一个高G/C区域，具有哺乳动物启动子的普遍特点。FGF9的空间构象是由C端和N端的2个α螺旋和12个β折叠组成的一个类似金字塔形的结构。在结构上，FGF9和FGF16、FGF20相似，为同一亚家族成员，FGF9与FGF家族FGF1、FGF2具有30%的同源性，并且氨基酸保守区完全相同，具有三叶草核心结构。FGF9与FGF16、FGF20均没有经典的信号肽序列，但其能依靠N端的35个氨基酸作为非剪切信号肽以及位于96～101位的EFISIA基序所具有的疏水性分泌到细胞外。

FGF9是一种肝素结合生长因子，为单链多肽，具有多种生物学活性，其活性依赖于肝素的存在。FGFR主要有4种(FGFR1～FGFR4)，均为单链酪氨酸激酶受体，结构十分相似，由胞外区、跨膜区、胞内区组成。FGF9主要与FGFR2和FGFR3结合，FGFR的结合需要肝素、受体和配体间形成三分子复合体。

FGF9及其受体在骨骼发育过程中起重要作用。在骨骼发育早期，FGF9能促进软骨细胞肥大；在骨骼发育后期，其主要调节生长板的血管化和成骨过程。在牙齿发育过程中FGF9与FGF4在调节牙尖的形成信号中心原发性釉结节中的表达水平上调，继而在继发性釉结节上表达，且FGF9的表达从原发性釉结节扩延到内釉上皮处。在连续不断切牙的生长过程中，FGF9表达于牙颈环上皮处。从而认为作为上皮信号分子FGF9在牙齿发育各阶段中间接地诱导牙上皮与间充质之间相互作用，在牙齿形态调节中起作用，甚至其可能参与到成牙本质细胞分化过程。FGF9广泛存在于中枢神经及外周神经系统中，对许多脑神经元有维持生存和促进生长及修复受损神经元并再生的作用，能显著的延缓神经元死亡^[12]和保护神经细胞的作用并防止脊根神经节神经的坏死，在小脑颗粒神经元的迁移中也起到关键作用。此外，FGF9还具有促进组织修复、调节视力、调节性腺分化、促进毛发再生、控制盲肠的形成以及卵巢癌肿瘤发生等多种生物活性。

FGF9结构和功能特点的多样性和复杂性，决定了其在许多领域的重要地位以及良好的应用前景，其适应症机制的研究主要有以下几方面：

（一）FGF9诱发卵巢癌的机制研究

FGF9具有癌基因活性，研究发现其与肺癌、肝癌、前列腺癌、大肠癌以及子宫内膜癌的发生发展有着重要的关系。增殖细胞、促进上皮细胞恶性转化和浸润内皮细胞都与FGF9的参与相关，在卵巢癌发生发展过程中起到了关键作用。

（二）FGF9对骨骼发育的作用机制