[发明专利]用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法

说明书

本发明属于医药技术领域，公开了一种用动态轴向压缩柱从金银花中分离纯化新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体的方法，其包括流动相配制、溶解过滤、动态轴向压缩柱填装、系统平衡、洗脱分离、浓缩等步骤。本发明在一次分离纯化过程中，可以同时制备四种单体，包括新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧马钱子苷，通过高效液相色谱法检测，其纯度均在90%以上。本发明的方法操作简单，生产周期短，制备效率高，产品质量可控，且所用有机试剂均可以回收再用，是一种高效、环保、适用性强的工业制备金银花单体的分离纯化方法。

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法。

背景技术

金银花(Lonicerae Flos)为忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(Lonicera.japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花。具有清热解毒，疏散风热的功效。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。

金银花的主要成分为有机酸类、挥发油类、黄酮类、三萜皂苷类、无机元素等。绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分。金银花主要的药理作用有：1.抗菌、抗病毒作用。金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用，包括金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌，肺炎球菌、绿脓杆菌、结核杆菌等。金银花中抗菌消炎的主要成分是绿原酸及异绿原酸。2.抗炎及解热作用。研究结果表明，金银花对角叉菜胶、蛋清、二甲苯所致的水中游不同程度的抑制作用。3.利胆保肝作用。金银花所含的多种绿原酸类化合物具有显著的利胆作用，可以促进大鼠胆汁的分泌。3.降血脂作用。4.对免疫系统作用。5.止血作用。6.抗氧化作用。金银花所含的绿原酸可以引起大鼠、小鼠中枢神经兴奋，口服大剂量绿原酸能增加胃肠蠕动，促进胆汁分泌。

绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分。现阶段关于从金银花中提取绿原酸的研究较多，但几乎没有从金银花中同时分离出多种单体的报道。目前工业上制备绿原酸的方法得到的绿原酸纯度较低，需经过多步分离纯化方可得到高纯度的绿原酸，且制备工艺复杂，分离步骤繁琐，溶剂消耗量大。

研究一种能够从金银花中大量制备出多种高纯单体的制备工艺可以有效的利用植物资源，为天然产物的开发提供物质基础。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法，该方法工艺简单，可同时制备多种高纯化合物，植物原料利用率高。

本发明通过一些技术方案实现：

用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法，包括以下步骤：

(1)提取溶剂的配制：用乙醇和水配制30％-95％的乙醇-水混合溶液作为样品提取溶剂；

(2)样品的提取浓缩：金银花药材，用步骤(1)配制的提取溶剂超声、回流或微波提取，过滤，减压浓缩得到样品浓缩液；

(3)浓缩液的萃取：将步骤(2)得到的样品浓缩液用1～3倍量乙酸乙酯萃取2～3次，萃取物浓缩至干，得到乙酸乙酯层浸膏；

(4)流动相配制：用弱极性溶剂配制流动相，作为样品洗脱液。

(5)样品溶液稀释过滤：将步骤(3)得到的乙酸乙酯浸膏，用步骤(4)配制的流动相稀释至浓度为10～50mg/ml，过滤作为样品；

(6)动态轴向压缩柱填装：将色谱填料用步骤(4)配制的流动相匀浆得到匀浆液，将匀浆液送入动态轴向压缩柱，排出流动相后压实色谱填料，完成动态轴向压缩柱的填装；

(7)系统平衡：用步骤(4)配制的流动相冲洗步骤(6)填装的动态轴向压缩柱，持续15-20分钟，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态；