[发明专利]一种小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型领域，尤其涉及一种小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型的建立方法。

背景技术

近年来，“通道病”受到广泛关注，尤其在高血压、肺动脉高压等发病、进展过程中，血管平滑肌电重建在血管平滑肌动力学改变并加重病情方面起着非常重要的作用，甚至提出了，在血管平滑肌由收缩表型转化为合成表型过程中，离子通道起到开关作用。然而，关于逼尿肌离子通道电生理特性改变即电重建(electricremodeling)与膀胱逼尿肌动力异常之间关系，研究报道甚少。研究表明，很多致病因素如膀胱出口梗阻(良性前列腺增生、尿道狭窄和后尿道瓣膜)、炎症、氧化应激等都可以诱导膀胱逼尿肌离子通道结构重建，最终导致逼尿肌细胞自律性、兴奋性和收缩性异常以及功能障碍，然而，目前引起膀胱过度活动症(OAB)发生、发展过程中，逼尿肌细胞本身的电重建是否为重要原因之一，尚不清楚。

国内外目前尚无利用小鼠部分膀胱出口梗阻模型探讨膀胱逼尿肌细胞电重建在膀胱过度活动症中的重要作用及分子机制。

发明内容

本发明的目的提供一种小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型的建立方法，解决上述现有技术问题中的一个或者多个。

根据本发明的一个方面，一种小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型的建立方法，包括如下步骤：选择5周龄成年ICR雄性小鼠，体重为28～32g，自由饮水；用苯巴比妥钠(33mg/kg)对小鼠腹腔注射麻醉后应用耻骨后膀胱颈部分结扎的方法进行手术；术后正常喂养，术后3周处死小鼠，取膀胱做实验。

本发明提供的一种小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型的建立方法，通过观察模型，可以得知在梗阻后的三周，膀胱显著性扩张、明显增大并伴有膀胱壁肥厚、增生；病理学检测结果显示，逼尿肌细胞增大、排列紊乱、逼尿肌层显著性增厚；离体组织实验表明，逼尿肌不规律但自发性运动出现，并对卡巴胆碱的反应明显增强，说明膀胱出口梗阻明显提高逼尿肌兴奋性。进一步在细胞水平观察到，模型膀胱逼尿肌细胞形态上完全与正常逼尿肌一致，但明显比正常细胞肥大；全细胞膜片钳结果表明，延迟整流性钾电流(IKv)明显增大。上述结果表明，在本模型中，膀胱逼尿肌形态和电生理特性均有异常。因此，该动物模型为研究逼尿肌细胞电重建与OAB之间关系的理想模型，对泌尿生理学和病理生理学具有重要的理论意义。

在一些实施方式中，所述耻骨后膀胱镜颈部分结扎的方法具体如下：对麻醉后的小鼠进行消毒、铺巾，取下腹正中切口、耻骨上1.5cm进腹，充分暴露膀胱；将膀胱向头端轻轻牵引，暴露膀胱颈口区域，将膀胱颈口两侧组织稍游离，辨认双侧输尿管，充分解剖尿道周围组织，用6个“0”薇乔丝线穿过膀胱颈部尿道后侧，将22G针管置入尿道旁，将尿道、针管一起打结，移除针管，稍压迫止血，无出血时分层缝合切口，再次消毒，完成。此方法简单有效，能方便的建立小鼠部分膀胱出口梗阻实验动物模型。

在一些实施方式中，所述小鼠为5周龄成年ICR雄性小鼠，体重为28～32g。此种状态下的小鼠身体状态最好，适宜实验之用。

在一些实施方式中，所述术后3周处死小鼠的方法为颈椎脱位的方法。

附图说明

图1为本发明提供的一种实施方式的正常和梗阻14天膀胱镜检示意图；

图2为本发明提供的一种实施方式的正常和梗阻膀胱壁H&E染色镜检示意图；

图3为本发明提供的一种实施方式的正常和梗阻膀胱逼尿肌细胞冰冻切片染色示意图；

图4为本发明提供的一种实施方式的正常与梗阻膀胱逼尿肌组织自发性收缩以及对M受体激动剂卡巴胆碱(cch)的反应示意图；

图5为本发明提供的一种实施方式的正常与梗阻膀胱逼尿肌细胞的示意图；

图6为本发明提供的一种实施方式的正常与梗阻膀胱逼尿肌细胞的细胞膜片钳IKv电流记录示意图。

具体实施方式

1)实验动物和材料：

ICR小鼠(5周龄，雄性)，购自中国医学科学院北京协和医院实验动物室(许可证号：SYXK京2011～2014)代购；