[发明专利]一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法

权利要求书

1.一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其具体流程为：

原种液体培养

将双歧杆菌菌种放入培养基中，所述培养基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏0.15%-0.28%、葡萄糖0.35%-0.58%、盐溶液0.15%-0.28%、蒸馏水95%-98%组成，然后将放入菌种的培养基放在通风处进行培养；

一级菌种培养

将土豆、麸皮放入蒸馏水中进行蒸煮，然后提取溶液，将溶液中加入植物蛋白质胨、牛肉膏、蔗糖、盐溶液，再将菌种放入培养液中，将溶液放置到通风处进行发酵培养；

二级菌种培养

制取一级培养液，但培养皿换为无色透明试剂瓶，将试剂瓶继续拧灭菌，灭菌后放入培养液，然后接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养24-96小时，当细胞达到1.0亿CFU/g时终止培养，室温下保存备用；

三级菌种培养

取植物蛋白胨、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培养基放入蒸馏水中进行溶解，以此作为培养基，然后进行二级菌种接种，接种20%后静置，当细胞达到1.8亿CFU/g时终止培养，室温下保存备用；

(4)固体培养

利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏进行固体培养基制作，然后对培养基进行冷却灭菌，然后将三级液态菌种浸入到固体培养内，然后将浸入菌种的固体培养基放入培养房内进行静置发酵培养，当细胞达到5亿CFU/g时终止培养。

2.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述一级菌种培养中各原料质量比为：土豆、麸皮溶液30%-70%，植物蛋白质胨15-20%，牛肉膏15-28%，蔗糖5-10%，盐溶液10-15%。

3.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述三级菌种培养中各原料质量比为：植物蛋白胨1-10%、海参蒸煮液7-10%、玉米浆2-8%、酵母膏8-13%、肉牛浸膏1-10%、番茄培养基2-8%、蒸馏水60-90%。

4.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述固体培养中，各原料质量比为玉米粉10-19%、大米粉14-10%、大豆粉4-10%、全脂乳粉5-20%、海参蒸煮液10-20%、玉米浆20-26%、酵母膏14-19%、肉牛浸膏10-20%。