[发明专利]同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的引物与方法

权利要求书

1.一种同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshotPCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对XRCC1_R399Q的上游引物5’-TCTGACTCCCCTCCAGATT-3’和下游引物5’-GCCCCTCAGATCACACCTA-3’，针对ERCC1_C118T的上游引物5’-TCCAGAACACTGGGACATGA-3’和下游引物5’-TCCCTATTGATGGCTTCTGC-3’，针对ERCC2_L751Q的上游引物5’-GGCAAGACTCAGGAGTCACC-3’和下游引物5’-CCCTCTCCCTTTCCTCTGTT-3’，针对GSTP1_I105V的上游引物5’-ACCCCAGGGCTCTATGGGAA-3’和下游引物5’-TGAGGGCACAAGAAGCCCCT-3’以及针对GSTM1_Loss的上游引物5’-GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC-3’和下游引物5’-CTTGGGCTCAAATATACGGTGG-3’；所述SNaPshotPCR引物包括：针对XRCC1_R399Q的SNaPshotPCR引物5’-CGTCGGCGGCTGCCCTCCC-3’，针对ERCC1_C118T的SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTTTAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAA-3’，针对ERCC2_L751Q的SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTTAGCAGCTAGAATCAGAGGAGACGCTG-3’，针对GSTP1_I105V的SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGTGGAGGACCTCCGCTGCAAATAC-3’以及针对GSTM1_Loss的SNaPshotPCR引物5’-TTTTCATCATAGACGAGAAAATCTACAA-3’。

2.根据权利要求1所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的引物，其特征在于：所述PCR扩增引物中，XRCC1_R399Q、ERCC1_C118T、ERCC2_L751Q、GSTP1_I105V和GSTM1_Loss的引物浓度比为1：1：1：1：1；所述SNaPshotPCR引物中，XRCC1_R399Q、ERCC1_C118T、ERCC2_L751Q、GSTP1_I105V和GSTM1_Loss的引物浓度比为1：1：1：1：1。

3.一种同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的方法，其特征在于：包括如下步骤：A）提取DNA样品；B）采用权利要求1或2中所述的PCR扩增引物进行多重PCR扩增，对扩增产物进行纯化；C）采用权利要求1或2中所述的SNaPshotPCR引物进行SNaPshotPCR扩增，对扩增产物进行纯化；D）毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

4.根据权利要求3所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤A）中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

5.根据权利要求3所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤B）中的多重PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃3min；阶段2：98℃10s；阶段3：58℃30s；阶段4：72℃1min；阶段5：返回到阶段2，29个循环；阶段6：72℃5min；阶段7：25℃保温。

6.根据权利要求3所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤C）中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：阶段1：96℃10s；阶段2：55℃5s；阶段3：60℃30s；阶段4：返回到阶段1，25个循环；阶段5：4℃保温。

7.根据权利要求3所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤D）中，采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。

8.根据权利要求1或2所述的同时检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性的引物在制备检测XRCC1、ERCC、GSTP1和GSTM1基因多态性试剂中的用途。