[发明专利]一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属天然产物制备领域。

背景技术

车前子为车前科植物车前PlantagoasiaticaL.或平车前PlantagoderpressaWilld.的干燥成熟种子，夏、秋二季种子成熟时采收果穗，搓出种子、除去杂质获得，现被我国食品药品监督管理局列为可用于保健食品的物品。车前子种皮中富含黏性多糖，具有通便、阻止有害物质扩散、有益肠道健康等功能，因此在国内外广泛使用。

车前子多糖是一种黏度很高的多糖，富含阿拉伯木聚糖，一定条件下可以形成弱凝胶。但是由于车前子多糖的高黏性特征，使得其在提取、纯化及后续生产过程中遇到诸多不方便，降低其黏度将大大方便其基础研究和产品开发应用。研究表明车前子多糖中存在一定量的阿魏酸，且阿魏酸对于车前子多糖的高黏性可能有很大作用。因此试图通过加入阿魏酸酯酶作用于车前子多糖，获得较低黏度的车前子多糖。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明按以下步骤。

（1）干燥、除杂：将车前子置于80%的乙醇中浸泡24h以上，过滤收集车前子，将其置于干燥箱中调节温度40~55^oC，烘干、除杂。

（2）采用沸水法提取车前子多糖：提取温度为100^oC，料液质量体积比（g/mL）为1:10，提取2次，每次提取时间为3h；将提取液以转速4800r/min、时间10min离心分离，上清液真空浓缩后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀，体系中最终的乙醇质量分数为80%，4℃下冷藏过夜；转速4800r/min、时间10min离心收集沉淀；沉淀依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇各洗涤两次，所得物质再经过冷冻干燥得到粗多糖组分。

（3）多糖纯化：将上述所得粗多糖组分，加入水配成质量分数为1%的多糖溶液，将配制的多糖溶液放入-80℃冰箱中冷冻，8h后取出冷冻的多糖再置于50℃水浴下溶解，溶解完全后用离心机转速8000r/min、温度10℃、时间35min条件下离心，上清溶液再重复上述“冷冻、溶解、离心过程”两次；将最后一次离心后得到的上清液装入截留相对分子质量为3500的透析袋中，透析72h。透析结束后，将透析液取出再经浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥得到纯化后的车前子多糖。

（4）低粘度车前子多糖制备：称取一定量的上述纯化后的车前子多糖，按照原料与水溶液质量体积比（mg/mL）为1:1~5:1的比例溶解多糖，加入阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比（U/mg）为0.1~0.5，酶的作用时间为2~24h；再将上述多糖、酶混合体系置于40℃水浴中反应。将反应后所得溶液进行透析，透析结束后再通过浓缩、冷冻干燥，即可获得低黏度车前子多糖。

本发明步骤（4）所述的阿魏酸酯酶与多糖的酶活质量比（U/mg）优选为0.1~0.3，多糖与水溶液质量体积比（mg/mL）优选为2:1~4:1，酶的作用时间优选为4~12h。

本发明的优点是：1、采用温和的条件制备低黏性车前子多糖；2、酶法处理前后的多糖基本结构特征无明显变化。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1。