[发明专利]一种检测ERCC1基因多态性的引物与方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测ERCC1基因多态性的引物与方法。

背景技术

铂类抗癌药物, 包括顺铂、卡铂和奥沙利铂等，是目前临床应用中对多种癌症具有较高活性的抗癌药物，主要通过引起细胞内DNA损伤来清除癌细胞。

切除修复交叉互补基因1(ERCC1)，为人类DNA损伤修复基因，位于染色体19q13.2-13.3。切除修复交叉互补基因2(ERCC2)，参与核苷酸切除修复和基因转录，在DNA损伤修复中起着重要作用。

现有研究数据显示，ERCC1_C118T C/C，C/T，T/T基因型频率分别约为52.6%，43.1%，4.2%；ERCC2_L751Q K/K，K/Q，Q/Q基因型频率分别约为84.92%，15.08%，0%。因此，通过ERCC1基因多态性的检测，有助于预测铂类药物化疗的预后，在帮助指导用药和个性化治疗方面具有重要意义。现有技术缺少一种特异性好、灵敏度高、可实现ERCC1基因多态性检测的引物及其方法。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种检测ERCC1基因多态性的引物与方法，具有特异性好、灵敏度高、准确性好等优点，实现了ERCC1基因多态性的检测。本发明检测的位点包括ERCC1_C118T：c.354T>C(p.Asn118=)(SNP：rs11615)。

本发明提供一种检测ERCC1基因多态性的引物，包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对ERCC1_C118T的上游引物5’-TCCAGAACACTGGGACATGA-3’(SEQ ID NO.1)和下游引物5’-TCCCTATTGATGGCTTCTGC-3’(SEQ ID NO.2)；所述SNaPshot PCR引物包括：针对ERCC1_C118T的SNaPshot PCR引物5’-TTTTTTTTAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAA-3’(SEQ ID NO.3)。

采用上述技术方案，本发明提供的检测ERCC1基因多态性的引物，可以实现ERCC1基因多态性的特异性检测，准确性好。

相应地，本发明还提供一种检测ERCC1基因多态性的方法，包括如下步骤：A）提取DNA样品；B）采用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行PCR扩增，对扩增产物进行纯化；C）采用权利要求1中所述的SNaPshot PCR引物进行SNaPshot PCR扩增，对扩增产物进行纯化；D）毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

优选地，所述步骤A）中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

优选地，所述步骤B）中的PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃ 3min；阶段2：98℃ 10s；阶段3：58℃ 30s；阶段4：72℃ 1min；阶段5：返回到阶段2，29个循环；阶段6：72℃ 5min；阶段7：25℃ 保温。即，Step 1：98°C for 3minutes；Step 2：98°C for 10 seconds；Step 3：58°C for 30 seconds；Step 4：72°C for 1 minute；Step 5：Go to step 2，29 times；Step 6：72°C for 5 minutes；Step 7：25°C forever。

所述步骤C）中的SNaPshot PCR扩增反应条件包括：阶段1：96℃ 10s；阶段2：55℃ 5s；阶段3：60℃ 30s；阶段4：返回到阶段1，25个循环；阶段5：4℃ 保温。即，Step 1：96°C for10seconds；Step 2：55°C for 5 seconds；Step 3：60°C for 30seconds；Step 4：Go to step 1，25 times；Step 5：4°C forever。

优选地，所述步骤D）中，采用GENEMAPPERID V4.1软件对检测结果进行分析。

此外，本发明还提供检测ERCC1基因多态性的引物在制备检测ERCC1基因多态性试剂中的用途。