[发明专利]一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及本发明涉及一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器的制备方法及应用。制备一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。

背景技术

CA72-4是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具有较高的特异性，其敏感性可达28-80%。CA72-4水平与胃癌的分期有明显的相关性，一般在胃癌的Ⅲ-Ⅳ期增高，对伴有转移的胃癌病人，CA72-4的阳性率更远远高于非转移者。CA72-4水平在术后可迅速下降至正常。在70%的复发病例中，CA72-4浓度首先升高。与其它标志物相比，CA72-4最主要的优势是其对良性病变的鉴别诊断有极高的特异性，在众多的良性胃病患者中，其检出率仅0.7％。本发明涉及本发明涉及一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器的制备方法及应用。

发明内容

本发明的目的之一是一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将该生物传感器成功应用于胃癌标志物CA724的检测。

本发明的技术方案

1．一种电沉积金及金复合物的胃癌标志物CA724生物传感器的制备方法

（1）依次用1.0、0.3、0.05μm的三氧化二铝抛光粉对玻碳电极抛光处理，用超纯水清洗干净；

（2）将玻碳电极放在0.02mmol/L的10mL的HAuCl₄的电化学沉积液中，沉积过程中利用计时电流方法，在-0.6V的条件下沉积100s后用超纯水清洗，干燥后在电极表面沉积了AuNPs；

（3）将6μL、5~15μg/mL的胃癌标志物CA724捕获抗体Ab₁滴至沉积了AuNPs的电极表面，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（4）滴加3μL、质量分数为5~15mg/mL的牛血清白蛋白溶液至电极表面，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（5）滴加6μL浓度为0.0001~6ng/mL的胃癌标志物CA724标准溶液至电极表面，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（6）将4~6μL检测抗体标记物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三铁-Ab₂溶液滴至电极表面，置于4℃冰箱中孵化1h，清洗后，晾干，制得一种Au-聚多巴胺/四氧化三铁胃癌标志物CA724的生物传感器。

2.检测抗体标记物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三铁-Ab₂溶液的制备

（1）四氧化三铁的制备

将0.54g的FeCl₃和0.15~0.25g柠檬酸钠加入装有20mL乙二醇的锥形瓶中，并且在室温下均匀振荡1h。将1.1~1.3g醋酸钠加入到混合物中继续振荡0.5h;将上述混合物放入高温反应釜内在200^?C的条件下反应12h，超纯水洗涤、60^?C条件下干燥后制得四氧化三铁；

（2）聚多巴胺/四氧化三铁的制备

将制备的35~45mg的四氧化三铁，溶解于20mL、含1~3mg/mL多巴胺的pH=8.5Tris-HCl溶液中，在室温下振荡8h，利用磁分离技术进行分离，超纯水洗涤，60^?C干燥后制得聚多巴胺/四氧化三铁；

（3）检测抗体标记物Au-聚多巴胺/四氧化三铁的制备

将2.0~3.0mg的聚多巴胺/四氧化三铁加入2.5mL、0.07mmol/LHAuCl₄溶液中，均匀搅拌，向上述溶液中加入1mL的0.005mol/L的柠檬酸钠后在室温下均匀搅拌2h，用磁分离技术进行分离，超纯水洗涤，60^?C条件下干燥制得Au-聚多巴胺/四氧化三铁；

（4）检测抗体标记物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三铁-Ab₂

将1.5~2.5mg的Au-聚多巴胺/四氧化三铁加入1mL、pH为7.4的PBS中均匀搅拌，继续加入1.0mL、5~10μg/mL的抗体Ab₂，混合；将混合溶液置于4^?C下反应12h，将检测抗体Ab₂负载于Au-聚多巴胺/四氧化三铁表面，利用磁分离方法进行分离，制得Au-聚多巴胺/四氧化三铁-Ab₂，分散于2mL、pH为7.4的PBS溶液中，置于4^?C的冰箱里备用。

3．胃癌标志物CA724的测定