[发明专利]一种蝎毒素蛋白包涵体的纯化与复性方法与应用

权利要求书

1.一种蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)将蝎毒蛋白包涵体投入变性缓冲液，搅拌处理，离心，收集沉淀，得到变性的蝎毒蛋白；

所述的变性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/LTris，1～10mol/LGdn-HCl，20～100mmol/LDTT，pH7～9，溶剂为水；

(2)纯化变性的蝎毒蛋白；

(3)用复性缓冲液溶解变性的蝎毒蛋白，复性处理，得到复性的蝎毒蛋白，

所述的复性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/LNa₂HPO₄，10～100mmol/LTris，0.1～1mol/LL-Arg，1～5mmol/LEDTA，0.1～5mmol/LGSH，0.05～0.5mmol/LGSSG，5～20％v/v甘油，0.01～5％v/vtritonX～100，pH7～9，溶剂为水。

2.根据权利要求1所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的蝎毒蛋白包涵体，是利用重组大肠杆菌发酵得到。

3.根据权利要求2所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，所述的重组大肠杆菌是将克隆有蝎毒蛋白基因的表达质粒转化大肠杆菌得到的。

4.根据权利要求3所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，所述的大肠杆菌为E.coliBL21(DE3)。

5.根据权利要求3所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，所述的表达质粒为pET29a。

6.根据权利要求3所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，所述的克隆有蝎毒蛋白基因的表达质粒，在蝎毒蛋白基因的5’端或3’端含有His-tag。

7.根据权利要求6所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，所述的克隆有蝎毒蛋白基因的表达质粒，在蝎毒蛋白基因的5’端含有His-tag。

8.根据权利要求1所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，步骤(2)是利用组氨酸亲和层析柱纯化得到变性的蝎毒蛋白。

9.根据权利要求1所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的复性处理，是将溶解有变性的蝎毒蛋白的复性缓冲液在4～25℃条件下保温12～72h。

10.权利要求1～9任一项所述的蝎毒蛋白的纯化与复性方法制备得到的蝎毒蛋白。

11.权利要求10所述的蝎毒蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。