[发明专利]分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及药物的提取与分离领域，具体涉及使用分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺方法。

背景技术

林可霉素化学名称为6-(1-甲-反-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1-硫代-6,8-二脱氧-D-赤式-a-D-半乳辛吡喃糖苷，是从链霉菌林可变种培养液中获得的一类抗生素。它可作用于敏感菌核糖体的50S亚基，阻止肽键的生成，从而抑制细菌的蛋白质合成，达到抗菌的目的。它适用于治疗革兰氏阳性菌所致的各种感染，例如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌引起的肺炎、脓胸、败血症、皮肤软组织感染、腹腔感染、骨关节感染、妇科感染疾病等。林可霉素具有生物医药的特性，并且抗菌能力强、抗菌谱广、用药较为简便(可口服、滴注、外用等)，因而医学界加大了对其药理学性质以及临床应用等方面的研究力度，各生产厂家也对林可霉素的分离提纯工艺进行了大量的探索，目前国内生产厂家采用的林可霉素提取分离方法主要以溶剂萃取、树脂吸附等为主。

专利CN104356179A使用LSA-100型大孔树脂柱提纯林可霉素，是先将林可霉素粗品加水溶解，水溶液经脱色、稀释、调节pH之后，上样吸附，饱和的树脂吸附柱经水洗后，以正丁醇解吸，再经浓缩结晶得到成品。此方法得到的林可霉素B组分小于1％，纯度高，不足之处在于林可霉素水溶液处理过程较为复杂。

专利CN103724380A使用陶瓷超滤膜对林可霉素发酵液进行直接过滤，再以仲辛醇与盐酸进行萃取与反萃取，一次反萃取液调碱性以后经过陶瓷超滤膜第二次过滤，再经过仲辛醇与盐酸的第二次萃取与反萃取后，结晶干燥得到成品。此方法林可霉素收率高，可达96％以上，并可有效地降低生产废水COD，不足之处在于其过滤操作需反复调节pH值，萃取、反萃过程较为繁琐。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效分离提纯林可霉素的工艺方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺，包括以下步骤：

将林可霉素发酵液过滤，以氢氧化钠水溶液调pH至10～11，用氯仿反复萃取2～3次得到萃取液；

将萃取液泵入林可霉素分子印迹聚合物填装的吸附柱，吸附分离至吸附柱达到饱和；

吸附达到饱和后，吸附柱用甲醇-醋酸混合液于25～40℃条件下以3～5ml/min的流速洗脱，洗脱液在60～70℃条件下真空浓缩至原体积1/3～1/2，调节pH为0.5～2.0，冷却至0～10℃结晶干燥得到林可霉素。

按上述方案，所述分子印迹聚合物按以下方法制备而来：

1)以苯乙烯为聚合单体，在分散剂的作用下，热聚合得到聚苯乙烯微球并作为种球；

2)以此种球为溶胀核心，在溶胀剂的作用下增大其体积并通过溶剂的作用形成多孔结构；

3)在多孔结构的表面使林可霉素与功能单体进行结合，并引发再次的聚合，在交联剂的作用下形成多孔网状分子印迹聚合物微球。

本发明的有益效果是：

分离流程较为简单，溶剂消耗低，萃取液与洗脱液可反复使用，吸附过程在有机溶剂中进行，因而吸附剂不会受到酸碱等物质的影响，并且分子印迹聚合物稳定性好，可多次重复再生使用。

按照本发明的工艺步骤，所制得林可霉素纯度为94.6％，收率81.93％，分离效果良好，适合于工业分离提取林可霉素。

具体实施方式

以下仅是对本发明的解释与说明，本发明保护范围不限于以下实施例。

方案中林可霉素分子印迹聚合物的制备过程如下：

1)将苯乙烯单体与无水乙醇混合，并加入聚乙烯吡咯烷酮与偶氮二异丁腈，其中控制苯乙烯与乙醇的体积比为1:(1～1.4)，偶氮二异丁腈与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:(5～7.5)；在隔绝空气的条件下60～70℃搅拌反应20～24h，分离、干燥得到成品聚苯乙烯微球；

2)取步骤1)聚苯乙烯微球与十二烷基硫酸钠均匀分散到超纯水中，搅拌溶胀，其中聚苯乙烯微球与十二烷基硫酸钠的质量比为(4～5):1；再加入偶氮二异丁腈、邻苯二甲酸二丁酯与甲苯搅拌溶胀20～24h，其中偶氮二异丁腈、邻苯二甲酸二丁酯、甲苯的质量比为1:(5.2～6.3):(8.7～9.6)；