[发明专利]具有高β-环化活力的环糊精葡萄糖基转移酶突变体有效
| 申请号： | 201510388389.6 | 申请日： | 2015-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN104911158B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 李兆丰;顾正彪;李才明;黄敏;洪雁;程力 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/75;C12P19/18 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 天冬氨酸 突变体 环化 环糊精葡萄糖基转移酶 天冬酰胺 甘氨酸 酪氨酸 定点突变 基因工程 双突变体 环糊精 精氨酸 酶工程 | ||
1.一种β-环化活力提高的环糊精葡萄糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第89位的酪氨酸突变为天冬氨酸，在单突变体的基础上，进一步将第577位的天冬氨酸突变为精氨酸，得到双突变体。
2.编码权利要求1所述突变体的核苷酸序列。
3.含有权利要求2所述核苷酸序列的载体或细胞。
4.一种获得权利要求1所述突变体的方法，其特征在于，根据编码野生环糊精葡萄糖基转移酶的核苷酸序列，分别设计并合成定点突变引物，对基因进行定点突变，获得编码突变体的基因，将编码突变体的基因在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB 600中进行表达。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，选择携带编码突变体的基因的突变质粒的表达宿主B.subtilis WB 600的单克隆于含5μg/mL卡那霉素和10μg/mL赤霉素的LB培养基中，在37℃、200r/min下培养8～12h，以体积比4％的接种量接种到含5μg/mL卡那霉素和10μg/mL赤霉素的TB培养基中，在37℃、200r/min下发酵48h；将发酵液于4℃、10000rpm离心20min以除去菌体，收集上清液并纯化，得到突变体的粗酶液。
6.一种提高环糊精葡萄糖基转移酶β-环化活力的方法，其特征在于，将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第89位的酪氨酸突变为天冬氨酸，在单突变体的基础上，进一步将第577位的天冬氨酸突变为精氨酸。
7.权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶突变体在环糊精生产中的应用。
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