[发明专利]多倍体千斤拔及其培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术育种领域，具体涉及多倍体千斤拔及其培育方法。

背景技术

千斤拔Moghania philippinens(Merr.et Rolfe)Li.为豆科千斤拔属植物，别名蔓千斤拔、吊马桩、吊马墩、一条根、老鼠尾、钻地风(四川)等，以根入药，主要分布于云南、四川、贵州、湖北、湖南、广西、广东、海南、江西、福建和台湾。已有的研究表明，千斤拔皂苷对修复神经损伤、治疗老年性痴呆、抗炎镇痛、增强免疫、抗疲劳、抗缺氧有明显作用，中国医科院、中国药科大学等都设置了专门的新药研究课题，澳大利亚等国已进入药理实验阶段。千斤拔还是国内制药企业用于生产治疗妇科炎症、风湿骨痛、跌打损伤、壮腰健肾类药品不可或缺的原料。现有常规二倍体千斤拔药材的单株产量较低，根部纤维含量较高，不利于其中有效成分的提取。

通过倍数性育种手段使千斤拔基因组多倍化，可以获得株型大、药材产量高、出膏率高的品种。目前尚未发现有多倍体千斤拔及其培育方法的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种多倍体千斤拔及其培育方法。该方法以特定浓度的秋水仙素为诱导剂，通过人工诱导获得千斤拔同源四倍体品种，继而再获得三倍体千斤拔。

本发明所述多倍体千斤拔及其培育方法包括四倍体千斤拔以及它的培育方法、三倍体千斤拔以及它的培育方法。

具体地，本发明包括四倍体千斤拔的培育方法，包括以下步骤：

1)获取二倍体千斤拔的种子苗；

2)选取生长势强的种子苗经暗培养后，以秋水仙素为诱导剂，采用液体或固体法诱导种子苗产生染色体基因组倍数性变化，之后转入分化培养基中进行光照培养，获得丛生芽；其中：

所述采用固体法诱导种子苗产生染色体基因组倍数性变化是指：将经暗培养的种子苗转接到含有0.015～0.035％质量秋水仙素的MS固体培养基中，于5～10℃条件下培养2～5d；

所述采用液体法诱导种子苗产生染色体基因组倍数性变化是指：在无菌条件下，将经暗培养的种子苗浸泡于经过灭菌的质量浓度为0.05～0.1％秋水仙素溶液中8～10h；

3)切取丛生芽转入生根培养基中培养成根茎叶完整的植株；

4)对所得植株进行染色体数目检测，筛选出四倍体植株(染色体数目2n＝4x＝44的植株)；

5)所得四倍体植株按常规技术种植，得到四倍体千斤拔。

上述方法的步骤1)中，可以按现有常规技术将二倍体千斤拔的种子培养成种子苗，这里不再详述。

上述方法的步骤2)中，所述的分化培养基配方为：MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+蔗糖2～5％+琼脂0.4～0.5％，更优选的分化培养基配方为：MS+6-BA 0.53mg/L+NAA 0.12mg/L+蔗糖3％+琼脂0.5％。在分化培养基中进行光照培养的培养条件与现有技术相同，优选为：温度为20～28℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为1000～2000lx。该步骤中，所述暗培养的操作及培养条件与现有技术相同。

上述方法的步骤2)中，在用液体法诱导种子苗产生染色体基因组倍数性变化时的操作温度与现有技术相同，通常是在18～25℃条件下进行。

上述方法的步骤3)中，所述的生根培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.01～0.1mg/L+NAA 0.4～1.0mg/L+蔗糖2～5％+琼脂0.4～0.5％+活性炭0.2～0.5％，优选的生根培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.05mg/L+NAA 0.45mg/L+蔗糖2％+琼脂0.5％+活性炭0.5％。在生根培养基中的培养条件与现有技术相同，优选为：所述光照培养的条件为：温度为20～28℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为1000～2000lx。

上述方法的步骤4)中，为了减少染色体数目检测的工作量，可以将步骤3)获得的根茎叶完整的植株与常规二倍体植株对照，以叶片大小、颜色，茎干作为指标，筛选出有明显变化的植株作为染色体倍数性加倍的候选植株，再检测这些候选植株的染色体数目，以筛选得到四倍体植株。对植株进行染色体数目检测的方法与现有技术相同，具体可以是：剪取目标株幼嫩根尖或茎尖0.5cm，用卡诺固定液(无水乙醇：冰乙酸＝3：1)固定15min以上，流水下冲洗15min,解离液(浓盐酸：甲醇＝1：1)解离2～30min，清水冲洗15min，切取根尖、茎尖0.1mm，用卡宝品红染色液染色，压片观察统计根尖或茎尖染色体。

本发明还包括由上述方法培育得到的四倍体千斤拔。