[发明专利]检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及稻瘟病相关研究领域，特别涉及一种检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记及其应用。

背景技术

氮素是植物主要的营养元素，对于正常生长发育必不可少，氮素的供应水平对水稻根系的生长形态、解剖结构，尤其是对化学组成的影响最为明显。已有研究表明，品种的抗病性受氮肥量影响较大，氮肥量越多发病越重，增施氮肥显著增加水稻叶瘟和穗颈瘟的发生程度，尤其是抗瘟性往往首先出现在氮肥施用量大的稻田，虽然抗性丧失的程度和快慢还受其它因素的影响，某些敏感品种，在高氮肥条件下，较其它品种更易丧失抗性，由于抗病性降低，病菌种群数量增大，新小种较易被发现；另外，抗病性降低程度依小种而异，即某些小种在高氮肥条件下更易增值；再者，抗病性降低程度因品种-小种组合而异，即某些组合在同一氮肥水平情况下，比其它组合更感病。许多研究学者都已注意到，稻瘟病的发生及其严重程度与水稻植株中氮的含量有关。在环境因素相同的条件下，植株中氮含量越高，稻瘟病病害越重。D.H.Long等通过两年大田试验，研究不同的氮肥水平和施氮方式对不同水稻品种稻瘟病的影响认为，少量频施氮肥可减少叶瘟的发生。任金平等的研究也发现，在稻瘟病得到有效控制情况下，产量随着施氮量的增加而提高，但在稻瘟病未得到有效控制的情况下，随着施氮量的增加，稻瘟病加重，产量降低。赵美琦等在研究水稻品种-稻瘟病小种相对寄生适度时注意到：氮肥施用量对水稻各品种与稻瘟菌小种组合的接种发病程度影响很大。

现有研究表明，稻瘟病的发生及其严重程度与水稻植株中氮的含量有关。可能是由于大量施氮促进植物生长，幼嫩组织增加，细胞壁变薄和强度下降，从而减低作物的抗性，增加感病几率，从生理上看可能是由于施氮增加了质外体中氨基酸、酰胺的浓度，酶活性和木质素含量降低所致。缺氮植物的分类化合物含量通常很高，当大量供应氮素时，酚代谢的一些关键酶活性下降，酚含量和抗稻瘟病的能力就降低。水稻稻瘟病随施氮水平的增加而增加，可能与具有显著抗稻瘟病病菌特性的酚类化合物和黄酮类物质的含量下降有关。随着氮肥用量的增加，植物体内糖类、淀粉含量下降，大量使用氮肥使合成酚的关键酶苯丙氨酸解氨酶和酪氨酸解氨酶活性降低，从而使植株总酚含量降低。在一定范围内，施氮量增加，多酚氧化酶活性降低，抗病能力减弱，易遭受病虫害侵袭]。

虽然目前对稻瘟病的发生与氮肥使用量之间关系的研究已经很多。但是，目前尚缺乏有效检测水稻稻瘟病抗与性氮肥施用量之间关系的有效方法和手段。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记，可用于高效快速检测氮肥的施用量对稻瘟病抗性的影响。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记，根据与氮诱导蛋白相关的基因Os04g0379600序列设计了一种检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记Mg-N-1，该分子标记参考的Os04g0379600基因的DNA核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

进一步的，以SEQIDNO:1序列为基础，利用Primerdesign设计的跨一个内含子的特异分子标记Mg-N-1，Mg-N-1标记的正反引物序列为：

正向引物(5′-3′)GCTAATGGCACAACCTGACA

反向引物(5′-3′)TAGGAGTATGCTGGCCATGT。

进一步的，上述基因及引物在检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型方面的应用。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明一种检测稻瘟病抗性与氮肥响应的表达型分子标记，可用于高效快速检测氮肥的施用量对稻瘟病抗性的影响。

附图说明

图1该基因表达的电泳图。

其中，1和2为用DNA样品进行扩增的电泳图，3和4为用cDNA样品进行扩增的电泳图，M为laddermarkerDL-2000，分子量标记从小到大为100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp和2000bp。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细描述：

1.样品的采集及总RNA的提取