[发明专利]抗人NMP-22的单克隆抗体及其检测试剂盒

说明书

本发明涉及抗人NMP‑22的单克隆抗体及其检测试剂盒。具体而言，提供了一种利用基因克隆重组技术表达的人核基质蛋白22(NMP‑22)，并应用免疫学技术获取抗人NMP‑22的鼠单克隆抗体。本公开还涉及一种特异性检测人样本中NMP‑22的试剂盒，其包含两株特异性的抗人NMP‑22的单克隆抗体。本公开的试剂盒使得能够迅速、灵敏、特异地定量检测样本中的NMP‑22含量。

技术领域

本公开属于分子免疫学领域，具体涉及重组表达的人核基质蛋白22(NMP-22)及其制备与纯化方法；应用免疫学技术获取的抗人NMP-22的单克隆抗体；以及人NMP-22的检测试剂盒。

背景技术

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤，也是我国最常见的泌尿系肿瘤，其中90％以上为膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)。

BTCC的生物学行为复杂多变，显著特征为高复发率和肿瘤生物学行为恶性程度低。BTCC表现为易复发、多发、浸润和转移。所以，这些因素容易影响对膀胱癌的诊断和治疗。早期诊断比较局限，如能及时发现与治疗，其五年生存率为94％；一旦肿瘤发生局部扩散和转移，五年生存率将分别降至49％和6％。因此，早期发现早期治疗对膀胱肿瘤患者的预后有很重要的意义。

目前，膀胱癌的诊断主要依靠膀胱镜检查和尿脱落细胞学。膀胱镜检查属于侵入性检查，患者较痛苦，并且其精确性受血尿的影响。甚至在某些情况下，膀胱镜检查有导致尿路感染的可能性，因而不适用于膀胱癌的群体性筛查。尿脱落细胞学检查虽然特异性高，但是灵敏度较差仅为30至50％，容易受到尿路感染等因素的干扰，对早期级别癌的灵敏度仅为30％。

通常，一种新的临床早期诊断和检测方法应该具有非侵入性、较好的灵敏度和特异性、操作简便、使用成本低等特点。因此，寻找灵敏度高、特异性强、并且便于群体性筛查的无创性检查方法是近年来膀胱癌临床研究的热点。

NMP-22是核基质的重要组成部分，和DNA的复制、转录及RNA的合成、基因表达的调控有关。NMP-22是核有丝分裂装置蛋白(NuMA)的一个亚单位。NuMA和有丝分裂期间纺锤体的形成有关，其主要功能为协调核有丝分裂期间染色体正确均匀地分配到子代细胞。故NMP-22多分布于有丝分裂较活跃的组织，如上皮细胞，尤其是尿路上皮细胞。当细胞恶变(malignant transformation)时，核内遗传物质在分裂末期分配极度异常，NMP22的合成激增，可视其为尿路上皮特异性肿瘤标记物。根据NMP-22在细胞中的作用推断，膀胱癌患者尿液NMP-22含量升高是由于癌细胞增殖异常活跃使细胞内NMP-22含量增高，在细胞凋亡过程中释放到尿液中所致。NMP-22在尿液中的含量在一定程度上反映了肿瘤细胞的增殖状况，提示尿液中NMP-22含量可作为筛选膀胱癌的一个肿瘤标志物，对判断疾病的进展及治疗效果评价有重要参考价值。

Carpinito等(Urinary Nuclear Matrix Protein as a Marker forTransitional Cell Carcinoma of the Urinary Tract，The Journal of Urology，第156卷第4期，1280–1285页，1996年10月)研究证实，活动期BTCC患者的NMP-22浓度和健康志愿者之间有显著差异。该研究测定了包括膀胱癌、良性膀胱疾病患者和正常人在内的667例的尿NMP-22浓度。活动性移行细胞癌患者的NMP-22浓度明显高于那些不患癌的患者。

FDA批准NMP-22检测可指导泌尿外科医生决定患者是否需要膀胱镜检查，但不能代替膀胱镜检查。有报导其敏感性和特异性远高于尿细胞学检查的敏感性。还有研究认为，NMP-22不仅适用于确诊前的筛查，还在治疗后随访中有参考价值。