[发明专利]栓菌及其应用

说明书

本发明涉及栓菌及其应用，该菌种生长快速，营养基质利用范围广，培养基成分廉价、易得，易于培养。利用该菌种所生产的漆酶可以被应用与生物质能源、纺织、食品、生物修复、造纸等方面。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及栓菌及其应用。

背景技术

栓菌属微生物，属于担子菌门的白腐真菌(white-rot fungi)。白腐真菌靠降解木质素—纤维素材料的能力穿入木质，侵入木质细胞腔内，释放降解性酶，导致木质腐烂并呈白色，是降解芳香化合物能力最强的微生物。白腐真菌主要利用分泌出的过氧化物酶(LiPs、MnPs和漆酶)对木质素进行催化氧化反应，从而降解木质素分子。与其它两种木质素降解酶LiPs和MnPs相比，漆酶是目前唯一一个实现工业化生产和应用的木质素降解酶。

漆酶广泛存在于木腐真菌中，并在植物、真菌、细菌和昆虫等物种中也有发现。研究指出高等真菌，尤其是担子菌门的白腐真菌，是目前最主要的漆酶生产菌种。漆酶(EC1.10.3.2)，属于蓝多铜氧化酶(blue multicopper oxidases,MCOs)家族的一种，能够在氧气作为电子受体的条件下氧化芳香族化合物，且底物作用特异性低。漆酶不仅可以氧化多酚类芳香族化合物，还可以利用在小分子介体的介导下形成的漆酶/介体体系(LMS)氧化非酚类物质或其它更为复杂的大分子。漆酶可选择性的去除木质纤维素中的木质素，有效地对偶氮染料进行脱色，还可以去除环境中酚类药物或其它类似毒性物质。因此，漆酶在生物质能源、纺织、造纸、废报纸脱墨、食品、生物修复和生物传感器等领域具有重要的研究和应用价值。

虽然漆酶已实现工业化生产和应用，但是目前研究或生产使用的漆酶产生菌株仍具有发酵产酶时间长和发酵活力较低等缺点，致使发酵成本过高，制约着漆酶的广泛应用。因此，为了更好地满足生产需求，获取具有发酵时间短、发酵活力高的漆酶产生菌株及其产酶培养基依然是漆酶生产和研究领域需要解决的难题。

发明内容

本发明的目的是提供栓菌及其应用，利用本发明栓菌生产的漆酶产量高，所生产的漆酶可以被应用与生物质能源、纺织、食品、生物修复、造纸等方面。

栓菌，保藏编号为：CCTCC NO：M2015191，拉丁文名称为Trametes sp.LS-10C，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015年04月03日，保藏地址为中国武汉武汉大学。

所述栓菌是从安徽省芜湖市神山公园、赭山公园和清水苗圃园中收集的富含腐烂植物茎叶组织的土壤中经过筛选获得；

该菌株在PDA平板上生长速度快，其菌落呈白色，局部菌丝细密，但总体菌落较蓬松，气生菌丝发达，基内菌丝不明显，菌丝纤细，无明显孢子生成。

该菌种筛选方法为：

1平板初筛

使用无菌水对采集的27个自然样各取0.1g用无菌水稀释至1mL，打碎混匀，于室温放置2d后使用无菌水进行梯度稀释至10^-1、10^-2和10^-3，分别取浓度为10^-1、10^-2和10^-3的样本稀释液各0.4mL涂布于无菌的固体筛选培养基平板(每L培养基含有：土豆浸出汁20mL(取200g土豆去皮加入800mL水，煮沸0.5h，冷却后定容到1000mL)，葡萄糖20g，愈创木酚0.4mL，卡那霉素100mg，琼脂粉20g，pH6.0)。将涂布后的平板放置于30℃恒温培养箱中培养5d，挑取周围能够形成红褐色氧化圈的菌落进行划线分离，同时记录并比对各筛选菌株的菌落直径与氧化圈大小。使用超低温(-80℃)甘油冻结管保藏法分别保藏所得菌株。

2摇瓶复筛