[发明专利]一种鸡新城疫和H9亚型禽流感二联疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物兽药技术领域，具体涉及一种鸡新城疫和H9亚型禽流感二联疫苗。

背景技术

H9亚型禽流感属于低致病性疫病，但与其他病原特别是新城疫、大肠杆菌混合感染能够提高其致病力，引起产蛋量严重下降和死亡率显著提高，给养禽业带来严重的危害。

低致病H9亚型禽流感的发生是潜在性的，分布极为广泛，危害持久和难以控制，给养禽业带来灭顶之灾，对人类的威胁同样严重。目前已有的禽流感(H9亚型)疫苗已在临床广泛使用，但存在抗体水平较低和抗体整齐度方面的问题，影响到疫苗的防治效果。而且，疫苗制造用的毒株为多年前的流行毒株，随着时间推移和环境变化，禽流感(H9亚型)临床流行毒株已经发生抗原变异，使用原有毒株制造的疫苗免疫产生的抗体，无法针对流行毒株提供完全的免疫保护，临床应用效果不佳。因此，H9N2禽流感的研究工作非常重要，迫切需要从临床上分离到免疫原性好、与现在流行毒株抗原性接近的毒株来制造疫苗，为禽流感(H9亚型)的防治奠定基础。

新城疫是新城疫病毒引起的禽类一种以呼吸道、消化道黏膜出血为特征的高度接触性、急性败血性传染病。同时感染其他病原如H9亚型禽流感，可引起的内源性感染，将会使产蛋鸡产蛋量下降，育成鸡死亡率增加，是危害我国养禽业的主要疫病之一。

本发明从全国各地临床发生H9亚型禽流感的养殖场分离H9N2禽流感，并对其临床流行病学和遗传变异进行分析，筛选到一株免疫原性好、与现有流行毒株同源性高的H9亚型禽流感病毒(QDY株)。本发明应用筛选到的新型H9亚型禽流感病毒与新城疫Lasota毒株制备二联灭活疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡新城疫和H9亚型禽流感二联疫苗，从而弥补现有技术的不足。

本发明的二联疫苗，包含有抗原和佐剂，所述的抗原为灭活的H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒；所述的H9亚型禽流感病毒为QDY株(Avian influenza virus)，已于2015年4月29日保藏于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201517；

作为优选，新城疫病毒为Lasota株，

所述的疫苗佐剂为白油佐剂。

上述的疫苗中H9亚型禽流感病毒的含量不低于10^7.0EID₅₀/0.3ml，新城疫病毒的含量不低于10^8.0EID₅₀/0.3ml。

本发明将H9亚型禽流感病毒(QDY株)、新城疫病毒Lasota株，分别接种鸡胚后收取病毒液，经甲醛溶液灭活后加油佐剂混合乳化制成疫苗。

本发明的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗免疫原性好，免疫后抗体产生快，产生的抗体滴度高且维持时间长，保存期长，免疫剂量小，选用的佐剂易于注射，可一针防治两种疾病，此疫苗具有高效、安全性好的优点。

具体实施方式

本发明筛选出效价高、免疫原性好的H9亚型禽流感毒株(QDY株)，接种于10日龄的鸡胚中进行培养，收获含病毒的尿囊液灭活；采用新城疫病毒Lasota株(中国兽医微生物菌种保藏管理中心CVCC AV1615)接种于鸡胚培养，收获尿囊液灭活，将两种灭活抗原按一定比例混合，加入油佐剂，制备了新型的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗。

下面结合具体实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1、制苗用抗原毒株(H9亚型禽流感病毒QDY株)的筛选

2013年从山东城阳地区已接种了H9亚型禽流感病毒疫苗的发病鸡群中，无菌采集发病鸡的心、脾等脏器和喉头、泄殖腔拭子，灭菌平皿中无菌条件下进行研碎，按1:5的比例加入含4000单位/ml双抗的生理盐水，于-20℃反复冻融3次。棉拭子直接放入含1万单位双抗的生理盐水中，2～8℃作用4h，脏器及棉拭子均3500rpm离心10min，取上清，混合后接种10日龄的SPF鸡胚5枚，0.2ml/枚。鸡胚置37℃孵育，每天早晚各照检一次，及时取出死胚置4℃冰箱中保存，弃去24h内的死亡胚，至96h时取出全部鸡胚。逐胚收集鸡胚尿囊液，血凝试验检测病毒效价，连续传代3次。收获的病毒液经纯化后进行了病毒含量、免疫原性、特异性及纯净性等方面的病毒特性的分析检测，结果表明该毒株病毒含量为10^8.9EID₅₀/0.1ml，该病毒仅与H9亚型禽流感病毒发生特异性反应，无细菌、支原体及外源病毒污染，适合作为制苗用毒株。