[发明专利]一种短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法及图谱

说明书

本发明提供了一种短穗兔耳草HPLC特征图谱检测方法和图谱。本发明通过串联色谱柱联合梯度洗脱，60min即可完成检测，所得特征峰专属性强，具有操作简便、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等优点，能较全面地反映短穗兔耳草所含化学成分的种类与数量，对于有效控制短穗兔耳草及其提取物的质量具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法和图谱，属于医药技术领域。

背景技术

短穗兔耳草，玄参科兔耳草属植物，对其研究较少。研究发现，短穗兔耳草成份复杂，主要含有大量黄酮类物质，而用于黄酮类检测的HPLC常规方法对其分离效果并不理想。对于难以分离的成份，现有技术中也有采用色谱柱串联的方法，但多为阳离子交换色谱柱与反相色谱柱串联，并且色谱柱串联要考虑的因素很多：统一通用的流动相、柱压产生大幅变化、死体积突变、峰宽增高、峰形变差及出峰难以识别(先流出第一根柱子的组分，在第二根柱子保留加强而导致后出峰)等。因此，针对短穗兔耳草，需要建立一种简单有效、操作方便、分离检测效果较好的质量检测方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法及其图谱。

本发明以芦丁为参照物，以十八烷基硅烷键合硅胶柱后接苯基键合硅胶柱为色谱柱；以乙腈-pH为6.0的含有体积份数比0.2％冰醋酸、体积份数比0.5％三乙胺的水混合溶液为流动相，通过梯度洗脱，对短穗兔耳草进行检测，60min即可完成检测，所得HPLC特征图谱能较全面地反映短穗兔耳草所含化学成分的种类与数量。

本发明的技术方案如下：

一种短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法，包括如下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱后接苯基键合硅胶柱为色谱柱；以乙腈为流动相A，以pH为6.0的混合溶液为流动相B，通过梯度洗脱，对短穗兔耳草进行检测，其梯度变化为：流动相中乙腈的百分比变化0～30分钟由12％升至20％，30～60分钟由20％升至50％；检测波长为360nm；流速：0.8～1.2ml/min；理论板数按芦丁峰计算不低于2000；其中所述流动相B为含有体积份数比0.2％冰醋酸和体积份数比0.5％三乙胺的水混合溶液；

对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含芦丁0.05-0.20mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取短穗兔耳草细粉10-50mg，加入甲醇10-50ml，超声处理3-15分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录60-80分钟内的色谱图，即得短穗兔耳草的HPLC特征图谱。

优选的，上述短穗兔耳草的HPLC特征图谱检测方法，包括如下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱后接苯基键合硅胶柱为色谱柱；以乙腈为流动相A，以pH为6.0的混合溶液为流动相B，通过梯度洗脱，对短穗兔耳草进行检测，其梯度变化为：流动相中乙腈的百分比变化0～30分钟由12％升至20％，30～60分钟乙腈由20％升至50％；检测波长为360nm；流速：1.0ml/min；理论板数按芦丁峰计算不低于2000；其中所述流动相B为含有体积份数比0.2％冰醋酸和体积份数比0.5％三乙胺的水混合溶液；

对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含芦丁0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取短穗兔耳草细粉25mg，加入甲醇25ml，超声处理5分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟内的色谱图，即得短穗兔耳草的HPLC特征图谱。