[发明专利]一种造影剂所致的急性肾损伤动物模型的构建方法

说明书

本发明提供了一种造影剂所致的急性肾损伤动物模型的构建方法，本发明所述构建方法中使用临床上常用的低渗造影剂，在相对较短的时间内制作稳定的CI‑AKI动物模型，有效避免其它混杂因素的干扰，为进一步进行CI‑AKI的病理生理机制、分子细胞学、分子生物学等研究提供基础，同时为更早地预防及治疗临床患者CI‑AKI的发生提供依据。

技术领域

本发明涉及一种动物模型的构建方法，尤其涉及一种造影剂所致的急性肾损伤动物模型的构建方法。

背景技术

随着使用造影剂的增强CT和介入诊疗术在临床中的广泛应用，国内使用造影剂的人群每年达到2-3千万人，造影剂所致急性肾损伤(Contrast-Induced acutekidneyinjury，CI-AKI)发生率在1％-5％，每年发生CI-AKI约20-100万例，CI-AKI显著增加病死率，高达9.7-14％，住院时间更长，医疗费用增加，为社会带来了巨大的经济与社会负担。2013年全国介入治疗注册病例数据显示PCI例数已经超过45万，冠脉诊疗术患者接近200万，但平均百万人口的PCI例数为309.42例，而美国约为1800例/百万人，因此我国冠脉介入诊疗术病例会继续增长，CI-AKI风险仍在不断增加，另外，有研究发现，对于合并高危因素的人群，如合并基础肾功能不全、糖尿病、充血性心力衰竭、高血压、高龄等，CI-AKI的发生率进一步升高，但目前CI-AKI发生的病理生理机制仍未完全清楚，而且尚无有效的治疗措施。

所以新的CI-AKI的防治措施的研究显得尤其重要。然而，新的防治措施的研究依赖于对CI-AKI发生发展的病理生理机制更深入的研究。另外，建立与临床实践中患者发生CI-AKI相吻合的稳定可靠动物模型，对于CI-AKI的发生机制研究极为重要。令人遗憾的是，既往关于CI-AKI的基础研究大部分基于相同的CI-AKI动物模型，通过联合脱水、非甾体类药如吲哚美辛、高渗造影剂如泛影葡胺，或者注射肾毒性药物(如甘油吲哚美辛、N-硝基-L-精氨酸甲基酯等)、外科肾部分切除方法，建立大鼠的CI-AKI模型，这些都与真实临床实践中CI-AKI的发生机制相差甚远。

Colbay等通过对大鼠禁水24小时后，按照术前大鼠体重静脉注射泛影葡胺7ml/kg，持续时间5分钟，48小时后通过取血样及肾脏组织，通过检测血样中肌酐的变化。最后发现，单独造影剂组血肌酐较其他组显著性升高(1.2mg/dl；range 0.9-1.2；P＝0.006)。同时，肾脏组织病理学检查发现，发生CI-AKI组可明显看到肾小球损伤、肾小管液泡状坏死、间质浸润水肿，最终导致肾小球滤过率降低。而ARI等研究者则先对大鼠静脉内注射吲哚美辛(10mg/kg)，15分钟再静脉内注射N-硝基-L-精氨酸甲基酯(NO合酶抑制剂)预处理，15分钟后尾静脉注射高渗造影剂(6ml/kg)来制作CI-AKI模型。

Al-Otaibi等通过使用甘油对SD大鼠模型进行预处理来制作CI-AKI模型。SD大鼠经过24小时禁水后，肌肉内注射甘油(10ml/kg)，之后不限制饮水及饮食。24小时后股静脉注射碘海醇(8ml/kg)，时间大于2分钟。3天后处死大鼠，通过心腔内取血进行血肌酐及尿素氮水平测定。结果发现，使用甘油预处理后再进行造影剂干预组较其他组血清肌酐水平显著性升高；此外，光学显微镜发现，使用甘油及造影剂组肾小管显著扩张、空泡形成及肾小管坏死。

Liu等则主要采用外科肾部分切除手术预处理的方法来制作CI-AKI模型。对实验大鼠采取外科切除5/6肾脏组织的预处理，之后连续于术后1、2、4、6、8、10周的时间对于血肌酐进行监测，发现术后6周时肾功能相对稳定。之后采用术后6周时的大鼠制作CI-AKI模型，48小时后尾静脉注射造影剂碘克沙醇(10ml/kg)，药物注射后不予以禁食禁水，24小时后取血及肾脏组织，测定血肌酐、尿素氮水平及运用HE染色、免疫组化方法评估肾脏损伤情况，最后发现，与对照组相比，CI-AKI组血肌酐、尿素氮及肾损伤组织学评分显著性升高。(Scr：1.21±0.11vs.0.82±0.09mg/dL；BUN：78.40±14.99vs.56.40±6.88mg/dL)。