[发明专利]一株对灰霉病菌有抑制作用的洋葱假单胞菌菌株QBA‑3及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株对灰霉病菌有抑制作用的洋葱假单胞菌菌株QBA-3及其应用。

背景技术

灰霉病菌是一种世界范围内广泛分布的重要植物病原真菌，该病菌寄主种类繁多，可侵染番茄、黄瓜等蔬菜以及葡萄、草莓水果等235种植物的茎、叶、花和果实引起灰霉病。该病害不仅在寄主植物生长季节可以发生，还可以在农产品的储藏期间发生，因此危害严重。尤其是近年来设施栽培方式的大面积推广，导致该病菌侵染来源广，传播速度快，灰霉病的发生越来越严重，其发生与流行往往造成严重的经济损失。据报道北方设施番茄灰霉病的发生普遍较重，一般年份造成的经济损失可达20％--30％，严重的年份50％以上甚至绝收。

灰霉病菌繁殖速度非常快，产生分生孢子的数量非常多，因此很容易发生变异而产生抗药性，目前已对农业生产上常用的苯丙咪唑类、二甲酰亚胺类、氨基甲酸酯类等多种杀菌剂产生抗性，因此不仅导致防效的降低，而且导致药剂使用量不断加大。化学药剂的过度使用，不仅造成农产品农残超标，危害消费者的身体健康，还导致环境污染，破坏生态平衡，影响农业的可持续健康发展。

生物防治是植物病害防治的重要措施之一，生防菌通过诱导寄主植物抗病性的产生或者通过对灰霉病菌的拮抗作用而到达防治或减轻病害的目的。目前已有木霉菌、枯草芽胞杆菌、沙雷氏菌、链霉菌等多种微生物对灰霉病菌拮抗作用的相关报道。生物菌剂或制剂可以减少或替代化学农药的使用，从而既能有效防治病害，又可避免化学农药的使用带来的负面效应。

发明内容

本发明的目的在于提供了一株对灰霉病菌有抑制作用的洋葱假单胞菌菌株QBA-3及其应用。本发明通过筛选获得了一株能够强烈抑制灰霉病菌分生孢子萌发的假单胞菌菌株QBA-3，通过接种实验，该菌株发酵物的发酵滤液对番茄灰霉病的防治效果为92.5％，实验结果证明该菌株或其制剂对灰霉病的防治具有广阔的应用前景。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一株对灰霉病菌有抑制作用的洋葱假单胞菌菌株QBA-3，其分类命名为洋葱假单胞菌Pseudomonas cepacia，保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC M 2015402。

所述菌株QBA-3具有鞭毛。

本发明还提供了所述的洋葱假单胞菌菌株QBA-3在制备防治灰霉病菌的生防制剂中的应用。

对上述技术方案的进一步改进：所述洋葱假单胞菌菌株QBA-3的菌液和发酵滤液对灰霉病菌孢子和芽管伸长均具有抑制作用。

对上述技术方案的进一步改进：所述洋葱假单胞菌菌株QBA-3的菌液中菌含量为OD₆₀₀＝0.314-0.565时对灰霉病菌分生孢子的萌发和芽管的伸长均具有较强抑制作用。

对上述技术方案的进一步改进：所述洋葱假单胞菌菌株QBA-3的发酵滤液的制备步骤为：将所述菌株QBA-3接种到液体YEPD培养基中在25℃-28℃下震荡培养72-96h，然后离心，过滤，获得含有QBA-3菌的发酵滤液。

对上述技术方案的进一步改进：所述菌株QBA-3接种到培养基中在130rpm条件下进行震荡培养。

对上述技术方案的进一步改进：经直径为0.22um的过滤器进行过滤。

与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明筛选到对灰霉病菌具有抑制作用的菌株QBA-3，经分类鉴别为洋葱假单胞菌，并经过对灰霉病菌孢子、芽管伸长和离体叶片的实验，证明本发明获得的菌株QBA-3具有对灰霉病菌的强抑制作用，可以将其制备成防治灰霉病菌的生防制剂，具有良好的市场应用前景。

附图说明

图1是本发明所述QBA-3菌株的发酵滤液对灰霉病菌孢子萌发抑制的实验结果；

图2是本发明所述QBA-3菌株的发酵滤液对灰霉病菌芽管伸长抑制的实验结果。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细的描述。

实施例1

一、菌株的分离与筛选

2013年3月19日于莱阳市温室采集番茄叶片样品20份，每叶片经75％酒精浸泡10秒钟，然后在0.1％的升汞中浸泡30秒，无菌水冲洗3次，转入灭菌处理的研钵中研磨，加无菌水稀释成10ml，继续用无菌水稀释至10^-5倍，分别取100ul涂LB平板(胰蛋白胨10克/升,酵母提取物5克/升,氯化钠5克/升，pH7.0)，30℃条件下培养。