[发明专利]脐带间充质干细胞的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于干细胞制备技术领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞的制备方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)可在体内或体外特定的诱导条件下，分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，且在连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。间充质干细胞根据存在组织的不通，主要包括骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞。其中，脐带间充质干细胞由于采自医疗废弃物新生儿脐带，相比骨髓间充质干细胞其具有来源丰富、成本低、对捐献者无损害等优势，具有更加广阔的前景。

脐带间充质干细胞大量存在于脐带沃顿胶(Wharton胶，或者又称华尔通胶)和血管周围组织中，具有自我更新、增殖和多向分化潜能。而其中由于沃顿胶的成分主要是胶原、透明质酸、硫酸软骨素(胶原占干重50％以上，以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原为主，还有Ⅴ型等胶原，占总胶原的95％以上；透明质酸、硫酸软骨素等糖胺多糖占脐带沃顿胶的近50％)，能更加利于脐带间充质干细胞的分离，因此目前脐带间充质干细胞多从沃顿胶中进行分离制备，而采用的方法一般为组织块贴壁法和酶消化法。其中，组织块贴壁法是将脐带组织切成小块，用间质细胞完全培养基在一定条件(5％CO₂、37℃、饱和湿度)的培养箱中培养，5～7d后将贴壁生长的长梭形细胞从组织中消化分离，再过5～7d后即获得脐带间充质干细胞。由于这一方法时间长，获取率和活性均不高，所以现有方式中多采用酶消化法进行。

现通常的酶消化法是将切成小块的脐带组织用含胶原酶和胰蛋白酶的消化液消化30min～16h。消化液中的胰蛋白酶是通过离解细胞间的粘蛋白、糖蛋白而影响细胞骨架从而使细胞分离，对细胞间质的蛋白成分及细胞膜蛋白均有很强的破坏作用，因此造成分离到的干细胞受到损伤导致活性不佳，难以扩增出理想数目和活性的间充质干细胞。

发明内容

本发明实施的目的在于克服上述从沃顿胶分离制备脐带间充质干细胞的不足，提供一种能够在制备过程中对干细胞损伤性更低、产率和细胞品质更高的脐带间充质干细胞的制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

在上述沃顿胶消化液的基础上，本发明进一步提出一种采用上述沃顿胶用酶解法从脐带中进行脐带间充质干细胞的制备方法，包括：

获取脐带组织；

将所述脐带组织用沃顿胶消化液进行消化处理，并搜集消化液；其中，所述沃顿胶消化液，包括透明质酸酶和硫酸软骨素ABC酶

从所述消化液中分离提取脐带间充质干细胞，之后再进行大量扩增培养。

采用本发明的上述制备方法，酶消化的过程中采用透明质酸酶和ABC酶联合消化沃顿胶，整体上可以获得细胞品质最优的脐带间充质干细胞，并且避免了胰酶和胶原酶长期消化对细胞体的影响，最终制备得到的脐带间充质干细胞细胞活性较高，获取率较高。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实例提供一种用于酶消化法从沃顿胶制备脐带间充质干细胞的沃顿胶消化液，相比现有由胶原酶和胰蛋白酶组成的消化液，本发明的消化液包括透明质酸酶和硫酸软骨素ABC酶。