[发明专利]一种抗植物病毒蛋白Rhp-PSP及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗植物病毒蛋白Rhp‑PSP及其制备方法和应用，抗植物病毒蛋白Rhp‑PSP为具有SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列；或将具有SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或者添加形成的且具有抗植物病毒活性的氨基酸序列。其制备方法以光合细菌PSB06的总DNA为模板，进行PCR扩增。本发明提供的抗植物病毒蛋白Rhp‑PSP对植株无毒，稳定性高，抗病性强，可应用于植物病毒的防治。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗植物病毒基因Rhp-PSP及其制备方法和应用。

背景技术

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)是重要的农作物病害的病原物，具有高度的传染性和广泛的寄主范围，可侵染烟草、番茄、十字花科等38科350多种植物，危害经济农作物并造成巨大的经济损失，20世纪末统计世界每年仅由TMV造成的损失就超过1亿美元。近年来，由于化学防治经济作物病害会造成对人体的危害和重大的环境污染，人们倡导使用无公害产品防治农作物病害。蛋白农药是一种新型的生物农药，对人畜无害，环境友好，既能提高农产品附加值，又能增加经济收益，具有广阔的市场前景和良好的市场竞争力。

我们发现可以抑制TMV活性的蛋白成分－高氯酸溶性蛋白(perchloric acid-soluble protein，PSP)，并命名为Rhp-PSP。高氯酸溶性酶PSP是一种核糖核酸内切酶，在无细胞翻译体系中能抑制蛋白合成，根据报道，PSP大多数都是在动物中被发现，而在微生物中鲜有被报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种植株无毒，稳定性高，抗病性强的抗植物病毒蛋白Rhp-PSP，还提供了该抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的制备方法和植物病毒防治中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种抗植物病毒蛋白Rhp-PSP，所述抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的氨基酸序列为以下a和b中的一种：

(a)具有SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列；

(b)将所述(a)的核苷酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或者添加形成的且具有抗植物病毒活性的氨基酸序列。

上述的抗植物病毒蛋白Rhp-PSP，优选的，所述抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的编码基因为以下(1)和(2)中的一种：

(1)具有SEQ ID NO.2所述的核苷酸序列；

(2)与所述(1)的核苷酸序列具有90％以上同源性且编码所述抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的核苷酸序列。

作为一个总的技术构思，本发明还提供了上述抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的制备方法，以光合细菌PSB06的总DNA为模板，进行PCR扩增，然后连接载体，获得重组子。

上述的制备方法，优选的，具体包括以下步骤：

S1、从PSB06菌液中提取PSB06总DNA；

S2、以所述PSB06总DNA为模板进行PCR反应得到PCR产物；

S3、将所述PCR产物与载体连接得到连接产物；

S4、将所述连接产物置于感受态细胞中转化，获得重组子。

上述的制备方法，优选的，还包括扩大培养步骤，具体为：

S5、取包含所述重组子的菌液，进行质粒提取步骤得到质粒DNA；

S6、将所述质粒DNA置于感受态细胞中转化、诱导表达，得到抗植物病毒蛋白Rhp-PSP。