[发明专利]景天根际铬抗性菌株，筛选方法及其应用

权利要求书

1.一株景天根际铬抗性菌株，其为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus） JCr9，其于2014年12月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10078。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于其16S rDNA的核酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.根据权利要求1或2所述的景天根际铬抗性菌株的筛选方法，其包括步骤：

（1）选择生长状况良好的景天植株进行处理：取铬（Cr）溶液母液2.5ml，稀释定容至40ml，均匀浇灌在生长供试植物的土壤中，使土壤的铬含量达到1000mg·kg^-1；在胁迫的条件下继续培养30d，每间隔4d浇水40ml；

（2）菌种的分离、纯化与筛选：在经过处理的植物根际取10g土样，置于90ml装有玻璃珠的细菌培养基中，在37℃恒温振荡器上振荡20-30min后取下，静止5min，使土壤沉淀；在沉淀以上的各个层面进行多次取样，接入新的细菌培养基中，37℃培养24h；取富集后的菌悬液，用倍数稀释法将其涂布于筛选培养基的平板上，倒置于37℃恒温培养箱中，培养48h；肉眼观察，分别挑选不同形态的典型单菌落，在培养皿底做好标记，并挑取单菌落在新的筛选培养基上划线分离；反复进行以上步骤，直至得到菌落特征一致的纯菌种；

（3）对于筛选出的已纯化菌种进行保存：将分离纯化得到的菌种接种于细菌培养基，培养后加入60％(v/v)甘油，使甘油的终浓度为10％(v/v)，置于-80℃进行保存；

其中所述细菌培养基为:牛肉膏3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，蒸馏水1000mL，pH7.0；

所述筛选培养基的配制方法如下：取所述细菌培养基1000ml，添加微量元素液和维生素液各10ml，121℃灭菌20min，冷却至70℃，加入铬溶液母液，使培养基中铬含量为1000mg·L^-1，37℃培养；

其中所述微量元素液为：MnSO₄  0.01g，ZnSO₄  0.05g，H₃BO₃  0.01g，CaCl₂  0.01g，定容至1L，4℃避光保存；所述维生素液为：肌酸 0.025g，抗坏血酸 0.025g，核黄素 0.025g，柠檬酸 0.02g，定容至1L，4℃避光保存；所述铬溶液母液为： K₂CrO₄配制成Cr⁶⁺浓度为200mg·ml^-1的母液，过滤除菌后，室温保存。

4.一种含有权利要求1或2所述的景天根际铬抗性菌株的组合物。

5.根据权利要求1或2所述的景天根际铬抗性菌株或权利要求4所述的组合物在处理含重金属铬的污染物或植物-微生物联合修复铬重金属污染土壤中的用途。