[发明专利]一种用于瘦肉精检测的无标记电化学免疫传感器的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于二硫化钼/银钯合金纳米复合材料构建的无标记电化学免疫传感器的制备方法，所制备的传感器可用于瘦肉精的检测。属于新型纳米功能材料与食品安全分析技术领域。

背景技术

瘦肉精是一类叫做β－兴奋剂（β-agonist）的药物，而不是某一种特定的药物。根据国务院食品安全委员会办公室《“瘦肉精”专项整治方案》（食安办〔2011〕14号）规定的“瘦肉精”品种目录为16种，包括：莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗。因为它们可以促进动物体蛋白质沉积和脂肪分解，抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，被用作牛、羊、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。但瘦肉精有很危险的副作用，当人们食用含有瘦肉精的肉制品时，会造成心血管系统的损坏，并可能出现严重的神经症状。因此，研发快速、灵敏检测瘦肉精的检测方法对于人们的日常生活至关重要。

电化学免疫传感器由于其灵敏度高、特异性好、操作简便等优点被广泛应用于食品分析和环境检测等领域，其中，无标记电化学免疫传感器因其制备相对简单、受环境影响小等优点，具有更广阔的应用前景。构建无标记的电化学免疫传感器，关键的技术是提高修饰电极对抗体的固定量和对测试底液的信号响应速度和大小。

二硫化钼，化学式为MoS₂，英文名称为molybdenumdisulfide，是辉钼矿的主要成分，是应用最广泛的固体润滑剂之一。其纳米二维结构，是性能优异的半导体纳米材料，除了具有大的比表面积，可以作为催化剂和生物抗体的载体，提高负载量，同时作为助催化剂也具有优良的电子传递性能。

目前，大多数的合成手段都是分开合成后，再将催化剂与载体进行复合，过程繁琐，产率不高。因此，对于一锅法制备具有优良催化性能的催化剂具有广泛的应用前景和重要的科学意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备简单、灵敏度高、特异性强的可用于检测瘦肉精的无标记电化学免疫传感器的制备方法。基于此目的，本发明先采用一锅法制备出二硫化钼/银钯合金纳米复合材料MoS₂/AgPd，并利用其对电极进行修饰，有效提高了电极的比表面积，增大了抗体的吸附量；并且极大增强了电极的电子响应速度和对测试底液的电催化信号强度等性能；然后通过吸附作用，固定瘦肉精抗体。在进行检测时，利用抗体与抗原的特异性定量结合，使得电极对H₂O₂的电流响应信号相应降低，从而实现了采用无标记的电化学方法检测瘦肉精的免疫传感器的构建。

本发明采用的技术方案如下：

1.一种用于瘦肉精检测的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：

（1）取35mL的十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶液，加入0.01~0.03g硝酸银AgNO₃和2~6mL的氯钯酸H₂PdCl₄溶液，搅拌15分钟后，继续搅拌并相继加入2~6mL的抗坏血酸溶液，0.5~1.5mL的钼酸钠Na₂MoO₄溶液和0.01~0.03g硫化钠Na₂S，搅拌15分钟后，放入反应釜中，在150~220℃下，反应12~16小时；冷却至室温后，使用去离子水离心洗涤，在40℃下进行真空干燥，即制得二硫化钼/银钯合金纳米复合材料MoS₂/AgPd，将其溶于去离子水制得MoS₂/AgPd溶液；

（2）以直径4mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5~12μL的MoS₂/AgPd溶液，室温下晾干；

（3）将步骤（2）中得到的电极用去离子水清洗，室温下晾干成膜，在电极表面滴涂5~12μL的瘦肉精抗体溶液，4℃冰箱中保存晾干；

（4）将步骤（3）中得到的电极用去离子水清洗，继续在电极表面滴涂5~10μL的牛血清白蛋白BSA溶液，4℃冰箱中保存晾干，用去离子水清洗，4℃冰箱中晾干成膜，制得无标记电化学免疫传感器；