[发明专利]一种复合酶制备黑豆抗氧化多肽粉的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗氧化多肽粉制备领域，具体涉及一种复合酶制备黑豆抗氧化多肽粉的方法。

背景技术

我国大豆资源丰富，其中黑豆被称为“豆中之王”，黑豆是一种具有高蛋白、低热量特点的绿色食品。黑豆自古就是一种药食兼用的保健食材，中医理论认为黑豆味甘性平，具有活血化瘀、乌发明目、延年益寿等功效。现代研究表明，黑大豆含有丰富的蛋白质、脂肪和微量元素，还含有皂苷、黄酮等功能因子，其优质豆类蛋白质比普通黄豆高24.5％，且必需氨基酸组成结构水平总体优于黄豆，与黄豆相比，黑豆赖氨酸高出15.5％，苏氨酸高出15.3％，蛋氨酸高出29％，适于抗氧化蛋白肽类产品的开发应用。

黑豆多肽是指黑豆蛋白质经酶水解、分离精制等过程而获得的对分子量低的多肽混合物，其水溶性很高(可溶性氮NSI约为99％)，可作为新的治疗药剂、功能食品添加剂或饲料添加剂来使用。现代营养学研究发现，多肽具有比氨基酸吸收快、吸收率好、生物效价高等特点，是具有多种生理功能的活性物质。近几年来，飞速发展的生物技术和分离纯化技术，使得人们发现存在于生物体内的多肽达到了数万种，且具有不同的生理功效。黑豆中蛋白含量丰富，可以通过酶解获得功能性多肽。据报道，黑豆多肽具有调节人体生理功能，如具有易吸收和低过敏性、降低血脂和胆固醇、降低血压、促进矿物质吸收和脂肪代谢、增强运动员体能，帮助恢复疲劳、促进钙磷和其他微量元素的吸收、促进大脑发育、提高记忆力增强免疫功能、保护表皮细胞、防止黑色素细胞沉淀等多种生物功能。因此，以黑豆为原料，制备具有抗氧化活性的肽类物质正受到蛋白制造者的关注，功能性黑豆多肽具有广阔的发展前景。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种复合酶制备黑豆抗氧化多肽粉的方法，所得黑豆抗氧化多肽粉降低了成本。

为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：

一种复合酶制备黑豆抗氧化多肽粉的方法，包括以下步骤：

第一步，黑豆蛋白质的分离

步骤1，挑选黑豆，除去杂质后置于4-10℃水中浸泡6-10h去除黑豆皮，置于烘箱中50-60℃下烘5-6h，使其含水量低于10%，再将烘干后的去皮黑豆研磨过筛得黑豆粉；

步骤2，将黑豆粉与脱脂溶剂按照质量体积比为1:10-15g/mL混合后于40-50℃下搅拌，倾去上清液，再加入石油醚继续搅拌，静置5h以上，倾去上清液，将沉淀物风干得脱脂黑豆粉；

步骤3，取脱脂黑豆粉按照1:8-10g/mL固液比加入蒸馏水搅拌，用乳酸调pH至4.5-5.5，再加入-0.5-0.9%黑豆粉重量的纤维素酶、0.5-0.7%的半纤维素酶和0.1-0.4%的果胶酶，搅拌后35-45℃下震荡卵育30-50min，再升温至50-55℃，再加入1.0%黑豆粉重量的碱性内切蛋白酶，5%的碳酸钠溶液调pH至7.5-8.0，继续震荡1-2h，加热至85-95℃，并保温10-20min，4000-5000rpm离心15-20min，收集上清液，离心后的沉淀按照脱脂黑豆粉固液比1:3-5g/mL的量加入去离子水，再按照第一次酶量的30%依次加入纤维素酶、果胶酶和碱性内切蛋白酶，离心得上清液，并入第一次离心上清液混合；

步骤4，用乳酸调节上清液的pH至5.0，离心收集沉淀，再调节上清液pH至4.7静置30min，离心收集沉淀，最后一次调节pH至4.4，静置后离心收集沉淀，混合三次沉淀，用去离子水洗涤后离心得沉淀物，将沉淀物4℃下预冷处理后，冷冻干燥得黑豆蛋白粉；

第二步，黑豆多肽粉的制备

取第一步所得的黑豆蛋白粉加入4-10℃水中，使得黑豆蛋白液质量浓度为3-6%，搅拌后调pH值为7.5-8.5，加热至90-95℃，灭菌15-20min，再降温至50-55℃，依次经过碱性蛋白酶水解、风味蛋白酶水解和中性蛋白酶水解，调节pH值至4.5，将黑豆蛋白液经微滤膜预处理，再超滤分离纯化，调节pH至4.5，按照活性炭：黑豆蛋白液为0.15-0.3g/L的量添加活性炭，45-55℃震荡1-2h后静置并离心，收集上清液，浓缩至浓度为25-50%后在4℃下进行遇冷处理，再冷冻干燥得黑豆抗氧化多肽粉产品。

作为优选的是，第一步，步骤1中黑豆粉至少80目。

作为优选的是，第一步，步骤2中脱脂溶剂为乙醇和石油醚混合物，其中乙醇体积分数为15%。