[发明专利]CIK的制备方法有效
| 申请号： | 201510400255.1 | 申请日： | 2015-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN105154397A | 公开（公告）日： | 2015-12-16 |
| 发明（设计）人： | 曾宪卓;鲁菲 | 申请（专利权）人： | 深圳爱生再生医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | cik 制备 方法 | ||
1.一种CIK的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，
获取单个核细胞，将所述单个核细胞与纤维蛋白凝胶混合，再对单个核细胞进行诱导培养成CIK。
2.根据权利要求1所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述单个核细胞的浓度为1*102-106个/ml。
3.根据权利要求1所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述纤维蛋白凝胶的制备过程为：
取抑肽酶溶解纤维蛋白原，获得溶液A；将凝血酶加入可溶性钙盐溶液中，获得溶液B；将溶液A和溶液B混合，即得到纤维蛋白凝胶。
4.根据权利要求3所述的CIK的制备方法，其特征在于，可溶性钙盐溶液为CaCl2溶液，且CaCl2溶液的浓度为30-50mmol/L。
5.根据权利要求3所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述溶液B中凝血酶的浓度为250-400U/ml。
6.根据权利要求3所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述抑肽酶的浓度为1000-3000KIU/ml；所述溶液A中纤维蛋白原的浓度为1.5～3.5g/L。
7.根据权利要求1所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述单个核细胞与纤维蛋白凝胶混合后的诱导培养过程为：
将单个核细胞与纤维蛋白凝胶置于含有抗CD3单克隆抗体和RetroNectin预包被的培养器皿中，并加入含PPP和IFN-γ的培养基进行培养；
再添加生长因子IL-1α和IL-2继续培养至单个核细胞转化成CIK。
8.根据权利要求7所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述抗CD3单克隆抗体的浓度为10-150ng/ml，RetroNectin的浓度为10-50g/ml。
9.根据权利要求7所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述培养基中PPP的体积分数为0.5-2％，IFN-γ的浓度为500-1500IU/ml。
10.根据权利要求7所述的CIK的制备方法，其特征在于，所述IL-1α在培养基中的浓度为50-150IU/ml，IL-2在培养基中的浓度为100-500IU/ml。
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