[发明专利]用于授精的精子悬浮液

说明书

本申请是申请人于2005年3月29日提交的题为“用于授精的精子悬浮液”的中国专利申请200580017376.2的分案申请。

技术领域

本发明主要涉及贮存精子细胞的方法。更具体地，本发明涉及贮存运动性比体内射出精子降低的分选及未分选精子的方法，提供该精子分散体系用于授精雌性哺乳动物的方法，利用该精子分散体系授精雌性哺乳动物的方法。

背景技术

通过人工授精(AI)使动物受精以及体外受精后的胚胎移植已经是成熟的技术。由于用于这些操作的精子的存活力和运动性会影响其结局(即，该受精和授精过程是否能成功产生后代)，精子细胞能够耐受授精过程中通常伴随的困难(包括如细胞的收集、贮存和运输)至关重要。

例如，在家畜产业中，常希望可对繁殖结果产生影响，而使其后代具有一种或多种优选性状的能力，如得到特定性别的后代。为达到这样的结局，从雄性哺乳动物收集精液样品，以染料染色，然后分选为带有X和Y染色体的细胞，任选在冰冻或冷却状态下贮存一段时间，然后运输至育种地点，最终在该处对雌性哺乳动物授精。这该过程中的每一步均对于精子细胞产生压力，导致精子细胞的存活力或运动性，特别是前向性运动性(progressive motility)降低。

Salisbury等人描述了将公牛射出的精液直接收集至稀释液中的技术，所述稀释液抑制细胞的运动性并防止其从周围精浆中吸收糖类。当收集射出精液至该稀释液中且将液体上的气相替换为100％的CO₂时，射出精液内的细胞会不再运动。只要将细胞留存于该稀释液中且排除空气，该细胞就可在室温下几小时内保持不运动，5℃下至少约8天保持不运动。

发明概述

本发明的多方面之一是在贮存、运输或受精中减少精子运动的方法，从而保护精子免受这些过程中的困难。因此在本发明的一个实施方案中，形成了包含精子和下调精子糖类摄取的组合物的精子分散体系(有时也称为精子悬浮液)。

简言之，本发明因此涉及贮存未分选精子的方法，所述方法包括形成包含精子、诱导精子不运动的组合物以及抗生素的精子分散体系，以及贮存该精子分散体系。

本发明还涉及贮存分选的精子的方法，所述方法包括形成包含精子、诱导精子不运动的组合物的精子分散体系，将该精子分散体系分选为分离群体，并于约-4℃至约30℃的温度下贮存一个群体，其中所述群体之一中的精子包括至少约65％带有X染色体的精子细胞或至少约65％带有Y染色体的精子细胞。

本发明还涉及授精雌性哺乳动物的方法，该方法包括用精子分散体系授精雌性哺乳动物，所述精子分散体系包含不运动的精子和诱导精子不运动的组合物。

本发明还涉及提供新鲜精子分散体系来授精雌性哺乳动物的方法，该方法包括形成包含精子和诱导精子不运动的组合物的精子分散体系、将该精子分散体系置于容器中用以进行远距离运输，并在形成精子分散体系后的约24小时内将该容器内的精子分散体系进行远距离运输。

本方面还涉及包括用于授精雌性哺乳动物的细长容器和精子分散体系的组合，所述精子分散体系包括不运动的精子和诱导精子不运动的组合物。精子分散体系包含在该细长容器中。

本发明还涉及包含不运动的精子、诱导精子不运动的组合物以及冷冻防腐剂的精子分散体系。该精子分散体系中也可包含增强精子存活力的添加剂，例如，抗生素、生长因子、己酸、过氧化氢酶或调节胞内和/或胞外氧化/还原反应的组合物。

本发明的其他方面和特征部分是显而易见的，部分将于此后说明。

发明详述

出人意料的是，已经证明相对于体内射精精子(相同种系)，运动性降低的精子，更具体而言是运动性暂时降低的精子，往往不必冷冻就更能耐受贮存和运输过程。大约从来源哺乳动物收集精子时起，就可以将精子保存在运动性降低的状态下，直至用该不运动精子授精雌性哺乳动物。因此，在优选实施方案中，可以制备特定浓度的新鲜未冰冻精子(分选或未分选的)用于贮存、运输或受精，所述精子相对于冰冻后解冻的相同浓度的精子而言，其中活细胞的数目增加或可运动精子的数目增加。