[发明专利]一种基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法

权利要求书

1.一种基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于包含如下步骤：

(1)将HepG2细胞消化后配制成细胞悬浮液，首次培养4～8h后吸出培养基，用PBS清洗；然后将细胞分为对照组、紫外对照组和紫外组，其中，紫外组加入含有待测物的培养基，对照组和紫外对照组加入与紫外组等体积的培养基，第二次培养20～30h后，用紫外线UVC辐照紫外对照组和紫外组细胞，对照组不进行任何辐照；当紫外对照组细胞死亡率为40％～60％时，结束紫外线UVC辐照并用PBS清洗三组细胞，加入培养基，第三次培养20～30h，其中，所述的待测物在培养基中的终浓度为A，为待测物对HepG2细胞无毒性且不具有抗增殖效果的浓度；

(2)检测细胞活性并计算、分析紫外组相对于紫外对照组的相对细胞存活率，如果相对细胞存活率＞100％，则终浓度为A的待测物具有抗紫外辐射能力，如果相对细胞存活率＝100％，则终浓度为A的待测物不具有抗紫外辐射能力；如果相对细胞存活率＜100％，则终浓度为A的待测物具有抗增殖效果。

2.根据权利要求1所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于还包含如下步骤：

(3)采用细胞活性染料对步骤(1)第三次培养后的细胞进行染色，并测定检测波长处的OD值，按照如下公式计算紫外组保护细胞未受损伤百分比：R(％)＝(A_d-A_u)/(A-A_u)×100；其中，R：紫外组保护细胞未受损伤百分比；A_d：紫外组吸光值；A_u：紫外对照组吸光值；A：对照组吸光值；然后结合CalcuSyn软件计算细胞修复EC50值。

3.根据权利要求1所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的细胞悬浮液浓度为3.0×10⁵～5.0×10⁵个/mL。

4.根据权利要求1所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的紫外线UVC波长为230nm～275nm；

步骤(1)中所述的紫外线UVC辐照时能量均匀，能量为500000～1000000μJ/cm²。

5.根据权利要求1所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的相对细胞存活率通过下述步骤得到：采用细胞活性染料对步骤(1)第三次培养后的细胞进行染色，并测定检测波长处的OD值，按照如下公式计算相对细胞存活率：V(％)＝A_d/A_u×100％；其中，V：相对细胞存活率，A_d：紫外组吸光值，A_u：紫外对照组吸光值。

6.根据权利要求1所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的待测物对HepG2细胞无毒性且不具有抗增殖效果的浓度通过如下步骤获得：

①将HepG2细胞消化后配制成细胞悬浮液，首次培养20～30h后吸出培养基，加入PBS清洗；然后将细胞分为对照组和毒性组，其中，毒性组加入含有不同浓度待测物的培养基，对照组加入与毒性组等体积的培养基，第二次培养20～30h后，检测细胞活性并计算、分析毒性组相对于对照组的细胞生长抑制率，当细胞生长抑制率不大于20％时，表明该浓度的待测物对细胞无毒性，得到待测物的安全浓度；

②将HepG2细胞消化后配制成细胞悬浮液，首次培养4～8h后吸出培养基，用PBS清洗；然后将细胞分为对照组和增殖组，其中，增殖组加入含有不同浓度待测物的培养基，待测物在培养基中的终浓度不高于待测物的最大安全浓度；对照组加入与增殖组等体积的培养基，第二次培养48～72h后，检测细胞活性并计算、分析增殖组相对于对照组的细胞相对增殖率，当细胞相对增值率不小于80％时，表明该浓度的待测物对细胞不具有抗增殖效果，得到待测物不具有抗增殖效果的浓度，即为待测物对HepG2细胞无毒性且不具有抗增殖效果的浓度。

7.根据权利要求6所述的基于细胞水平的抗紫外辐射评价方法，其特征在于：

步骤①中所述的细胞悬浮液的细胞浓度为3.0×10⁵～5.0×10⁵个/mL。