[发明专利]抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫检测试剂，特别是一种抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂。

0.01-0.2％(W/V)指每100ml溶剂中添加0.01-0.2g溶质，本文中类似之处意见同此之处。

背景技术

胶乳增强免疫比浊法是在免疫比浊法基础上发展的一种测定人体液特种标志蛋白含量的检测方法。其基本原理是：将待测物质相对应的具有高特异性、高亲和力抗体包被至纳米胶乳微球上，当此微球与含有待测样本混合时，在合适的反应条件下，抗体与样本中抗原特异结合，形成抗原-抗体-胶乳微粒复合物，在短时间内迅速聚集在一起，改变反应液的散光或透光性能，并且在一定范围内，反应液吸光度值变化与待测样本中的抗原含量成正比关系，利用标准品绘制标准曲线，便可根据样本吸光度值变化测定待测物含量。由于抗体特异性识别抗原，所以该方法具有很好的检测特异性；纳米胶乳微球的引入使反应液浊度变化更为显著，从而提高试验的灵敏度，能测定体液中微量蛋白含量；同时胶乳增强免疫比浊法能利用普通生化分析仪进行检测，操作简单，容易实现自动化，不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和重复性好，可快速、准确获得检测结果，对疾病早期诊断和治疗具有重要临床意义。

胶乳增强免疫比浊法常规检测的一个限制是易于受到由可能存在于测试样品中的嗜异性抗体引起的干扰，尤其是类风湿因子引起的干扰。类风湿因子(rheumatoid factor，RF)是抗人IgG分子Fc片段上抗原决定族的特异性抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。在商业免疫类检测试剂中所采用的抗体大多是动物来源的IgG类抗体，Fc段与人IgG的Fc段具有较高的同源性，能被RF识别并结合，所以在待测物质为阴性、RF阳性的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。

免疫检测试剂研制中，减少类风湿因子或异嗜性干扰的方法通常有：(1)从样品中去除干扰性的免疫球蛋白或使其失活。比如使用IgG固相吸附剂吸附样本中的类风湿因子，或使用含有2-巯基乙醇的稀释液稀释样本，以降解IgM型类风湿因子，但这会使检测操作复杂化，并且有可能在去除干扰蛋白的同时也减少了待测物质的含量或活性。(2)使用减少干扰的封闭剂，大多为IgG，市场上有许多商品化的封闭剂。但由于类风湿因子或异嗜性抗体的多样化，以及各种产品所使用的抗体不同，目前尚未有一种产品可以有效消除所有干扰，通常需要使用不同产品进行组合、筛选，不但增加工作量、挺高试剂成本，另一方面由于使用多种不明成分的封闭剂，也不可控制地引入新的干扰检测结果的因素。(3)修饰测定抗体以使其更不易与类风湿因子反应。目前最常使用的一种方法是将检测IgG抗体酶切去除Fc片段，用F(ab’)₂替代完整的IgG，既保留其识别结合抗体的活性，又消除Fc的干扰，减少试剂的非特异性反应。但在IgG的酶切、纯化制备工艺中会损失一部分抗体且对抗体活性也有一定程度影响，提高试剂成本，更重要的是试剂制备过程进一步复杂，对控制试剂批间差设置了不可逾越的障碍，从而限制了此类试剂在临床上的推广。

发明内容

为解决上述问题，本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂，试剂组成简单，且具有良好的通用性，针对胶乳增强免疫比浊试剂具有较为广泛的通用性，可以比较有效地消除大多数类风湿因子的干扰，提高检测结果的特异性和准确性。

本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂，包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R2包括抗体致敏的胶乳微粒，试剂R1的PH值为5.5-6.0。优选为试剂R1的PH值为5.5-5.7。

本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的一种改进，试剂R1还包括0.01-0.2％(W/V)的蛋白变性剂。优选为试剂R1还包括0.01-0.1％(W/V)的蛋白变性剂。

本发明公开的抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的一种改进，蛋白变性剂为十二烷基硫酸钠、尿素、盐酸胍中的任一。

本发明方案中控制PH和加入蛋白变性剂是基于：类风湿因子或异嗜性抗体多为多重特异性抗体，相较于一般抗体与抗原的专一地特异性结合反应，其对不同物种的检测试剂抗体结合能力相对较弱，利用这种亲和力上的差异，适当降低检测反应pH值或加入适量的蛋白变性剂均可以解离蛋白间的相互作用，能在不影响检测抗体与待测抗原特异反应的前提下，减弱类风湿因子对检测抗体的非特异结合反应，从而有效消除类风湿因子对检测结果的干扰。