[发明专利]一种开环西松烷二萜类化合物及其分离制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学领域，具体地说是一种开环西松烷二萜类化合物及其分离制备方法和在抗肿瘤方面的应用。

背景技术

西松烷二萜（Cembranoid diterpenes）是由4个异戊二烯首尾相连形成的大环二萜，是一类母体骨架具有十四元环和3个对称分布的甲基与1个异丙基的天然产物 ^[1]。西松烷二萜类物质是烟草中一类重要的二萜类物质，是烟叶香气和香味成分的重要前体物，对烟叶香气风格和品质具有决定性影响，是开展烟叶品质研究的关键化学物质之一。自1962年以来，已从烟草中发现了百余种该类化合物^[2]。此外，西松烷二萜类成分具有较强的抗肿瘤、抑菌、抗炎和调节植物生长等生物活性^[3-4]，因此引起合成化学家和药物化学家的极大兴趣和高度重视^[5-6]。

肺癌（Lung cancer，又称支气管肺癌 Bronchopulmonary carcinoma）是世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。在我国，肺癌的发病率和死亡率分列男性肿瘤首位，女性肿瘤第二位。肺癌的治疗长期以来一直是公众和医学界关注的热点议题。肺癌中约有85%是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）^[7]，且部分就诊时已属晚期^[8]。目前肺癌的治疗方法仍以手术、化疗和放疗为主，但其疗效已达到一个平台，毒性及不良反应也限制了其临床应用。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，分子靶向治疗成为目前肿瘤治疗的热点，但在长期治疗中易出现耐药现象，且不能满足临床需要。在药物发现中，从植物中寻找并开发具有抗肿瘤活性成分具有广阔的研究前景。

近年来，西松烷二萜类成分的研究主要集中在海洋生物中，烟草相关西松烷二萜类成分的研究却鲜有报道。因此针对烟草西松烷二萜类成分开展系统研究，丰富烟草西松烷二萜类成分的组成，促进烟草西松烷二萜类成分相关研究进程具有重要意义。烟叶（Nicotiana tabacum L.）富含西松烷二萜类成分，在前期研究中发现烟叶西松烷二萜类成分具有显著的抗肿瘤活性。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提供了一种从烟草中分离纯化西松烷二萜的方法，得到了的一个新的开环西松烷二萜类化合物。并通过深入研究，还发现该化合物且具有显著的抗肿瘤活性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种开环西松烷二萜类化合物，是由烟草中分离纯化而得到，该开环西松烷二萜化合物具有如下结构：

该开环西松烷二萜化合物的分离制备方法包括如下步骤：

（1）新鲜烟叶样品真空冷冻干燥，粉碎；

（2）乙醇回流提取粉碎后的烟叶样品，浓缩提取液，得到浸膏；

（3）将步骤（2）中所得浸膏浮于水中，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，具体是先应用低等极性溶剂石油醚萃取三次，合并萃取液得到烟叶提取物低等极性成分及色素；而后，应用中等极性溶剂二氯甲烷萃取，得到烟叶提取物的中等极性成分。

（4）将步骤（3）中所得的二氯甲烷萃取物浓缩并上样至硅胶柱色谱，以石油醚：丙酮的体积比为10：0-0:10的混合溶剂进行梯度洗脱，按照所使用的不同梯度的洗脱液收集流份；

（5）将步骤（4）中由石油醚：丙酮体积比为8:1的混合溶剂洗脱下来的流份上样硅胶柱色谱，用二氯甲烷：甲醇为100:1-40:1的混合溶剂梯度洗脱；

（6）将步骤（5）中由二氯甲烷：甲醇体积比为60:1的混合溶剂洗脱下来的流份应用制备型高效液相色谱仪，以甲醇：水为89:11的流动相洗脱，得到目标化合物。

在本发明中，其中步骤（4）中所使用的混合溶剂中石油醚：丙酮的体积比例依次为10:0, 10:1,8:1, 6:1, 5:1, 3:1, 2:1和0:10。步骤（5）中所使用的混合溶剂中二氯甲烷：甲醇的体积比例依次为：100:1, 80:1, 60:1和40:1。步骤（6）中所使用的制备型高效液相流动相流速为2mL/min，检测波长为210nm。

根据本发明的具体实施方案，其中步骤（4）中所述的硅胶柱色谱为粒径100-200目的硅胶色谱柱，步骤（5）中所述的硅胶柱色谱为粒径300-400目的硅胶色谱柱。