[发明专利]一种用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法

说明书

技术领域

本发明属于蜜蜂科学技术领域，具体涉及一种用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法。

背景技术

由于蜜蜂具有许多独特的特性而被广泛应用于发育与生殖生物学、表观遗传学、学习与记忆、认知、导航和社会行为等诸多领域的科学研究中，随着西方蜜蜂全基因组测序的完成，越来越多的有识之士认为蜜蜂有望成为一种新兴的模式生物。

成功的实验室人工饲养蜜蜂幼虫技术体系是蜜蜂作为模式生物研究的基础和保证。蜜蜂是典型的真社会性昆虫，具有明确而细致的劳动分工，群内有专职的哺育蜂饲喂幼虫，在自然条件下，进行过人工操作的幼虫往往会被蜜蜂遗弃，从而造成人为干预下对蜜蜂幼虫研究的困难。人工饲养蜜蜂幼虫技术在实验室内培养箱中进行，它可人为控制幼虫食物成分，排除哺育蜂的影响，进而许多研究都可得到直接明确的结果。

目前，室内人工饲养蜜蜂幼虫技术已被广泛应用于蜜蜂幼虫的生长发育、级型分化、营养、病理、药理及生态风险评估等方面的研究。尽管用培养箱培育的蜜蜂幼虫可发育为工蜂或蜂王，但现有的研究表明由室内人工饲养幼虫发育而来的蜜蜂绝大部分或全部都为工蜂。经过多年研究，我们成功研发出用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的技术，用本发明技术培育的蜜蜂幼虫羽化后的成蜂全为蜂王，且羽化率可高达75％以上(与目前国外报道的培养箱培育的工蜂羽化率水平相当)，至今未发现有与本发明相同或相似的报道。

本发明的技术，不仅有助于研究蜜蜂发育生物学中的重大科学问题(如雌性蜜蜂级型分化的分子机理)，而且在蜜蜂遗传育种工作中也具有极大的应用价值。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，建立一种用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，在蜜蜂发育生物学研究和蜜蜂遗传育种工作中具有重要的理论和实践意义。本发明为实验室内高效培育西方蜜蜂蜂王方法的首创。

本发明采用的技术方案如下：

一种用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，蜜蜂幼虫食物的制备：

用超纯水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的质量浓度为10％-24％，果糖的质量浓度为10％-24％，酵母提取物的质量浓度为1％-5％，然后将混合溶液与蜂王浆以1:1的质量比混合均匀后，加入50-100mg/L保幼激素，混匀，制得蜜蜂幼虫食物；

步骤(2)，蜜蜂幼虫的饲养：

通过隔王处理得到日龄一致的西方蜜蜂(Apis mellifera)幼虫，提出巢脾，用移虫针将1～2日龄蜜蜂幼虫转移到细胞培养板内，每孔一只，将培养板放入培养箱中培养，培养箱中温度34-36℃，相对湿度70％-90％；采用步骤(1)制得的蜜蜂幼虫食物饲喂幼虫，每天饲喂1-2次，每次100-250μl蜜蜂幼虫食物，并观察、记录幼虫生长情况；当培养板中出现尿酸结晶时，将幼虫(预蛹的健康虫体)转移至新培养板，此后幼虫不再进行饲喂，注意观测并记录虫体变化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂个体，即为蜂王。

进一步，优选的是步骤(1)所述的超纯水为Milli-Q超纯水。

上述技术方案中步骤(1)所述的保幼激素为JH Ⅰ或JH Ⅲ。

进一步，优选的是所述的用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，蜜蜂幼虫食物的制备：

用Milli-Q超纯水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的质量浓度为10％，果糖的质量浓度为10％，酵母提取物的质量浓度为1％，然后将混合溶液与蜂王浆以1:1的质量比混合均匀后，加入80mg/L JH Ⅰ，混匀，制得蜜蜂幼虫食物；

步骤(2)，蜜蜂幼虫的饲养：

通过隔王处理得到日龄一致的西方蜜蜂幼虫，提出巢脾，用移虫针将1～2日龄蜜蜂幼虫转移到细胞培养板内，每孔一只，将培养板放入培养箱中培养，培养箱中温度34℃，相对湿度70％；采用步骤(1)制得的蜜蜂幼虫食物饲喂幼虫，每天饲喂1次，每次250μl蜜蜂幼虫食物，并观察、记录幼虫生长情况；当培养板中出现尿酸结晶时，将幼虫(预蛹的健康虫体)转移至新培养板，此后幼虫不再进行饲喂，注意观测并记录虫体变化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂个体，即为蜂王。

进一步，优选的是所述的用培养箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，蜜蜂幼虫食物的制备：