[发明专利]胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒及检测系统

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒及检测系统。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90％为起源于腺管上皮的导管腺癌。通常发病后的患者，5年生存率<1％，是预后最差的恶性肿瘤之一。

导致胰腺癌预后生存率如此低的重要原因在于胰腺癌早期无任何症状，难以在胰腺癌发病潜伏期或者初期被检测发现，从而贻误最佳的治疗时间。主要难以被检测发现是因为在发病初期无任何症状，而且目前所能采用的检测精确度最好的CA19-9、CEA、CA242胰腺癌检测标记物进行检测时，有一定的阳性率，且不具备高特异性。根据统计数据显示，采用上述标记物在胰腺癌孕育期检测(癌变之前)敏感性较低，如发病前1年，有68％的敏感性，发病前两年，敏感性为53％。而采用其他的常规临床技术检测，如B超、CT、MRI、ERCP、PTCD、血管造影、腹腔镜等检查到发现癌变时已处于癌症中晚期，极大耽误了诊断和治疗。

发明内容

本发明实施的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种能够准确性和特异性更好的胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒，包括CRP单抗、ICAM-1单抗、OPG单抗和CA19-9单抗，以及用于形成双抗夹心的酶标二抗。

在上述双抗夹心的试剂盒的基础上，本发明进一步还提出一种包括上述胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒的检测系统。

本发明的检测试剂盒和检测系统，以针对本发明通过“差减法”的方式筛选得到的CRP、ICAM-1、OPG和CA19-9这四种胰腺癌蛋白生物标记物，进行免疫制备特异性CRP单抗、ICAM-1单抗、OPG单抗和CA19-9单抗为基础，并且结合双抗夹心的酶标二抗，通过抗原-抗体的特异性结合并联合双抗夹心的二抗从而对上述生物标记蛋白进行检测，具有比较高的准确性和特异性。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为本发明实施例检测芯片中固相基质上的点样孔的排布示意图；

图2为本发明实施例胰腺癌蛋白生物标记物的检测芯片封装之后的整体形状示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提出一种胰腺癌蛋白生物标记物，包括CRP(C反应蛋白)、ICAM-1(细胞间黏附分子-1)、OPG(骨保护素)和CA19-9(糖链抗原19-9)。

本发明根据对胰腺癌的检测和检查，提出上述生物标记物，相比现有临床分析的手段和通常用的CA19-9、CEA、CA242胰腺癌检测标记物，本发明的标记物更加准确。本发明的上述生物标记物组合的发现和提出基于本身生物标记物是反映疾病存在和状态的一种可测量的指示物，在疾病、应激和康复的过程中，任何的生理变化最终都能在蛋白水平上得到体现，是疾病研究最直观的手段；并且多个蛋白生物标志物组群与慢性病患者的临床及预后密切相关，表明同步联合测定多个蛋白因子有助于更全面的了解疾病进程。

上述提出的生物标记物组合中的蛋白，属于疾病所特有的调节性蛋白。由于组织液，如血浆中蛋白种类过千，浓度范围跨度高达10¹⁰，用最先进性的仪器也只能测到浓度范围跨度10³；为攻克健康背景蛋白对疾病特有的调剂蛋白的干扰。在本发明采用差异分析的方法筛选到以上标志蛋白，并进行了验证。具体筛选过程如下：

(1)选取已知身体状况的受试者共210例，其中健康对照55例，胰腺癌初期患者(未转移)65例，发生转移胰腺癌患者90例。(本研究已被伦理审核机构批准，所有受试者均签署知情同意书。)

分别取受试者血液样本2ml，加入1％肝素，于4度，3500RPM离心15min后将血浆分装分别根据患病与否分为健康对照血浆样本、胰腺癌初期(未转移)患者血浆样本和发生转移胰腺癌患者血浆样本；

(2)然后用健康对照血浆样本作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体；并用该制备的多克隆抗体作为亲和介质制备亲和层析柱；

(3)将胰腺癌初期患者样本，发生转移胰腺癌患者样本分别用上述亲和层析柱上样过柱子，收集流穿液。