[发明专利]破伤风类毒素单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种破伤风类毒素单克隆抗体及其应用，属于免疫学领域。本发明将破伤风类毒素免疫接种小鼠后，将鼠脾脏细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，筛选产生抗破伤风类毒素的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.10590,其分泌的单克隆抗体效价高达10⁷，亲和常数为1.24×10⁹M^‑1，可用于制备破伤风类毒素抗原检测试剂盒，也可以应用于酶联免疫法检测破伤风疫苗生产过程以及成品疫苗中类毒素的含量检测，具有广泛的应用前景与市场价值。

技术领域

本发明涉及免疫学与疫苗学领域，具体涉及一种破伤风类毒素单克隆抗体及产生该抗体的杂交瘤细胞株以及抗体的应用。

背景技术

破伤风是由破伤风梭菌(Clostridium tetani)经由皮肤或黏膜伤口侵入人体，在缺氧环境下生长繁殖，产生破伤风毒素而引起阵发性肌痉挛的一种特异性感染。破伤风是一种感染性疾病，不是传染性疾病，不在人群中爆发流行，人与人之间不能相互感染。绝大多数病例是由于外伤感染所致，除外伤感染外还有新生儿破伤风等。虽然破伤风的发病率及死亡率在发达国家已显著下降，但是在大部分发展中国家仍然是一个主要的公共卫生问题。死于破伤风的总人数中80％为新生儿，热带地区婴儿破伤风的病死率大85％。

破伤风是疫苗可以预防的传染病中唯一的非传染性疾病，全球自20世纪40年代广泛使用破伤风类毒素(TT)以来，尤其是1974年全球实施扩大免疫规划(EPI)后，破伤风的发病率得到有效控制，发病率和死亡率明显下降。但是，破伤风带来的沉重疾病负担在发展中国家尤其在新生儿时期依然存在，甚至在2002年，全球因新生儿破伤风死亡的人数仍有18万。目前破伤风类毒素与白喉和无细胞百日咳疫苗组成的联合疫苗DTaP已成为许多国家儿童联合免疫的基础。我国现有的破伤风疫苗有5类，分别是吸附精制破伤风类毒素，吸附百日咳、白喉和破伤风类毒素混合制剂，吸附无细胞百日咳、白喉和破伤风类毒素混合制剂，吸附精制白喉和破伤风二联类毒素，成人用吸附精制白喉和破伤风二联类毒素。

破伤风梭菌产生两种外毒素，即破伤风菌溶血素和破伤风痉挛毒素。破伤风菌溶血素是一种氧敏感的血溶素，在引起暴露部位感染的过程中发挥作用，但与发病机制无关。破伤风痉挛毒素也称破伤风毒素，是一种能引起破伤风症状的神经毒素。通过化学方法将破伤风毒素灭活后，制成类毒素，其仍可以保留免疫原性，是破伤风疫苗中的主要组份。

破伤风类毒素是破伤风疫苗中的主要活性成分。目前《中华人民共和国药典》2010年版三部中对于破伤风疫苗中破伤风类毒素抗原含量的测定主要包括絮状单位试验、蛋白氮含量测定、SDS-PAGE纯度测定以及效价测定。其中，由于絮状单位试验的结果判定采用观察法，且试验结果受反应时间和环境温度影响很大，试验结果的准确性和精确性较差；蛋白氮含量检测通过蛋白氮含量间接推断破伤风类毒素含量，检测结果准确性与破伤风类毒素纯度密切相关，受杂质影响较大，精确度和准确度较差；SDS-PAGE法主要用来做对破伤风类毒素的鉴别和定性，无法准确的定量，而效价实验步骤复杂、过程较长且需要大量实验动物，不利于疫苗生产过程中对于各个步骤破伤风类毒素含量的监测，也违背WHO关于减少动物使用量的精神，且以上检测方法都无法大批量的对样品进行检测。因此使用破伤风类毒素单克隆抗体采用ELISA法对于破伤风类毒素纯化各个步骤样品以及破伤风类疫苗成品中破伤风类毒素抗原含量进行检测，将大大提高检测的准确性、特异性和工作效率，降低试验的时间成本和资金成本。

发明内容

本发明的目的是突破目前破伤风疫苗生产过程各个步骤以及成品中对于类毒素抗原含量检测方法特异性差、检测效率低的缺点；提供一种一致性好、效价高、均一度高、具有良好特异性的低成本的抗破伤风类毒素单克隆抗体，实现降低成本、提高质控的特异性和效率的目标。

为了达到上述目的，本发明提供一种破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.10590。