[发明专利]一种用于血液直接荧光PCR扩增的反应液及其试剂盒

说明书

本发明适用于生物医学技术领域，提供了一种用于血液直接荧光PCR扩增的反应液及其试剂盒，所述PCR反应液中含有下列组分：寡肽、Brij‑58、Tween20、甲酰胺。所述血液直接荧光PCR试剂盒，包括用于血液直接荧光PCR扩增的反应液。该用于血液直接荧光PCR扩增的反应液可将未经提取、纯化处理的血液样本直接用于PCR扩增，从而避免了提取过程中的核酸损失和有毒试剂的使用，使得血液荧光PCR省时、简单方便、成本低廉且扩增效率高。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种用于血液直接荧光PCR扩增的反应液及其试剂盒。

背景技术

近年来，随着生物、医学、法医学等各相关领域的发展，荧光PCR技术得到了越来越广泛的应用。特别是对于血液遗传病，感染性病毒及疾病和遗传背景分析，荧光PCR技术已经成为不可或缺的基本技术。而血液作为一种重要的生物分析样本,其内含有大量的DNA聚合酶抑制物质，如血红素、杂蛋白、脂肪等。因此，基于现有技术，无法实现荧光PCR方法直接对血液中的核酸进行扩增。通常，为了完成血液样本核酸的荧光PCR扩增，必须先从血液中对核酸物质进行纯化处理。目前血液基因组提取的方法主要有酚-氯仿抽提法、柱提取法和磁珠法。尽管具体的提取方式不一样，但是都包括以下三个过程：一是破裂细胞膜和核膜；二是纯化核酸即去除蛋白质等影响后续PCR反应的杂质；三是洗脱核酸。通过提取处理虽然可以获得纯度比较高的核酸，但是核酸提取过程往往会导致80-90％以上的核酸损失，同时繁琐的提纯步骤增加了样本间交叉污染的风险，从而增加了后续荧光PCR扩增失败的可能。此外，由于提取过程耗时长，成本高，且需借助苯酚等有害试剂，增加了操作者感染的风险，且难以实现高通量检测。因此，血液样本能够直接作为模板或经过简单处理就能够作为模板进行荧光PCR扩增检测，成为血液荧光PCR扩增亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种扩增效率高、成本低的用于血液直接荧光PCR扩增的反应液，旨在解决现有技术对血液进行PCR扩增时，需要预先对血液进行核酸提取纯化处理，从而导致核酸大量损失、且增加了交叉污染以及有毒试剂使用的问题。

本发明的另一目的在于提供一种血液直接荧光PCR试剂盒。

本发明是这样实现的，一种用于血液直接荧光PCR扩增的反应液，所述PCR反应液中含有下列组分：寡肽、Brij-58、Tween 20、甲酰胺。

以及，一种血液直接荧光PCR试剂盒，包括上述用于血液直接荧光PCR扩增的反应液。

本发明实施例提供的用于血液直接荧光PCR扩增的反应液，通过对PCR反应液中进行合理配制，添加了特异的协同组分，使血液中的血红素、蛋白质和脂肪等DNA聚合酶抑制物变性，以降低其对后续荧光PCR的抑制作用；同时，促进DNA聚合酶活性，使得荧光PCR扩增能直接以血液为模版、在抗血液抑制作用的突变型DNA聚合酶的作用下进行高效和特异的荧光PCR扩增。所述用于血液直接荧光PCR扩增的反应液的使用，省去了对血液样本进行荧光PCR扩增时进行核酸提取纯化的步骤，避免了核酸的损失，显著提高了荧光PCR扩增的效率和成功率；同时，避免了核酸提取纯化中交叉污染的可能和有毒试剂的使用，复合环保理念。

附图说明

图1是本发明提供的1份人血液样本在不同寡肽浓度的PCR反应液的扩增荧光扩增曲线图；

图2是本发明提供的1份人血液样本在不同dNTP浓度的PCR反应液的扩增荧光扩增曲线图；

图3是本发明提供的1份人血液样本在不同Brij-58浓度的PCR反应液的扩增荧光扩增曲线图；

图4是本发明提供的1份人血液样本在不同Tween 20浓度的PCR反应液的扩增荧光扩增曲线图；

图5是本发明提供的1份人血液样本在不同甲酰胺浓度的PCR反应液的扩增荧光扩增曲线图；