[发明专利]添加醇类促进二萜类化合物LibertellenoneH产量的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域；更具体地，本发明涉及一种提高二萜类化合物Libertellenone H产量的方法，通过在发酵培养基中添加醇类来大大提高二萜类化合物Libertellenone H的产量。

背景技术

北极弯孢聚壳菌(Eutypella sp.)属于丝状真菌，其是分离自北极高纬度(78°55’N)仙女木根基土壤的一种丝状真菌，该属真菌在全球分布较为广泛，且能够产生许多结构新颖、功能独特的次级代谢物，比如桉烷型倍半萜、海松烷型二萜、三萜、细胞松弛素类、聚酮类和环二肽类化合物。从该菌发酵产物中分离鉴定的两种新型异海松烷型二萜类化合物Libertellenone G和Libertellenone H对人肺癌细胞株H460、人胶质瘤细胞株U251、人胃癌细胞株SG7901、人胰腺癌细胞株SW1990、人子宫颈癌细胞株Hela和人肝癌细胞株Huh-7这7种肿瘤细胞株均有一定抑制活性。其中Libertellenone H对Mcf-7乳腺癌的抑制作用最强，IC₅₀达到了3.31μmol/L，和阳性对照紫杉醇的IC₅₀相当，具有潜在的开发应用前景。

然而，Libertellenone H在Eutypella sp.的原始产量极低，甚至低于HPLC检出限，严重限制了对其进行进一步的体内外活性评价及药代药动力学等药理学研究。

因此，本领域迫切需要找到提高Libertellenone H发酵产量的方法，从而为抗肿瘤研究提供新的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过添加醇类促进二萜类化合物Libertellenone H产量的方法。

在本发明的第一方面，提供一种提高Libertellenones H的产量的方法，所述方法包括：培养北极丝状真菌Eutypella sp.，从而生产Libertellenones H；并且，在北极丝状真菌Eutypella sp.的培养基中添加醇类，所述的醇类选自甲醇或乙醇。

在一个优选例中，所述的醇类为AR级甲醇或乙醇。

在另一优选例中，添加所述的醇类的初始时间是发酵起始起算的第48～96小时；较佳地，添加所述的醇类的初始时间是发酵起始起算的第60～84小时。

在另一优选例中，添加醇类后，醇类在培养基中的最终浓度为1～10％(v/v)；更佳地为2～6％(v/v)，如4％(v/v)，5％(v/v)。

在另一优选例中，所述的醇类的添加方式为：每次添加按照体积0.25～2.5％(v/v)的醇类，从第一次添加起每隔18～30小时添加1次，共添加2～4次，使醇类最终浓度为1～10％(v/v)；更佳地为2～6％(v/v)，如4％(v/v)，5％(v/v)。

在另一优选例中，所述的醇类的添加方式为：每次添加按照体积0.5～1.5％(v/v)的醇类，从第一次添加起每隔20～28小时添加1次，共添加2～4次，使醇类的最终浓度为2～6％(v/v)，更佳地为3～5％(v/v)。

在另一优选例中，所述的醇类的添加方式为：每次添加按照体积1～2％(如1.333％)(v/v)的醇类，从第一次添加起每隔24小时添加1次，共添加3次，使醇类的最终浓度为4％(v/v)。

在另一优选例中，所述的培养基包含：

在另一优选例中，所述的培养基的pH调至5.8±0.2；较佳地pH调至为5.8±0.1。

在另一优选例中，所述的北极丝状真菌是北极丝状真菌Eutypella sp.D-1。

在另一优选例中，培养北极丝状真菌Eutypella sp.的温度是28±2℃。

在另一优选例中，所述的方法还包括：从发酵液中分离纯化出Libertellenone H。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、发酵培养基中添加甲醇对弯孢聚壳菌D-1菌体生长及Libertellenone H合成的影响。

图2、发酵培养基中添加乙醇对弯孢聚壳菌D-1菌体生长及Libertellenone H合成的影响。

图3、发酵培养基中终浓度4％的乙醇不同添加时间对弯孢聚壳菌D-1菌体生长及Libertellenone H合成的影响。

具体实施方式