[发明专利]三大类菌混合液体发酵、固体发酵物饲料添加剂及其制备方法

权利要求书

1.三大类菌混合液体发酵、固体发酵物饲料添加剂，其特征在于所述的混菌发酵物是由乳酸菌类5种菌：CGMCC1.0557植物乳杆菌、CGMCC1.1854嗜酸乳杆菌、CGMCC1.1480保加利亚乳杆菌、CICC6026植物乳杆菌、ACCC10637嗜酸乳杆菌；酵母菌类3种菌：CGMCC2.0120产朊假丝酵母、ACCC20060产朊假丝酵母、安琪酵母；芽孢杆菌类6种菌：

CGMCC1.2009凝结芽孢杆菌、CGMCC1.0813地衣芽孢杆菌、CGMCC1.1806枯草芽孢杆菌、CGMCC1.0504枯草芽孢杆菌、ACCC10619枯草芽孢杆菌、CICC10262纳豆芽孢杆菌发酵而成的液体制剂和固体制剂。

2.根据权利要求1所述的混菌发酵物，其特征在于：固体发酵饲料添加剂含水量30%-40%。

3.根据权利要求1所述的混菌发酵物，其特征在于：液体发酵饲料添加剂的添加量在畜禽饮水中添加0.5%-3%；固体发酵饲料添加剂在畜禽饲料的0.5%-5%。

4.权利要求1所述的混合发酵物饲料添加剂中液体发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于：乳酸菌类5种菌、酵母菌类3种菌、芽孢杆菌类6种菌在同一发酵罐中进行厌氧和耗氧培养；

包括以下步骤：

a.母种培育：将上述乳酸菌5种菌分别取0.5ml菌液接种到已灭菌装有液体培养基的试管中，在37℃条件下厌氧培养48小时，母种备用；

所述液体培养基为MRS乳酸菌培养基和鲜奶培养基；

将上述酵母菌3种菌分别划斜面到灭菌后装有固体培养基的试管中，在28℃条件下培养24小时，母种备用；

所述斜面培养基为PDA培养基；

将上述芽孢菌类6种菌分别划斜面到灭菌后装有固体培养基的试管中，在37℃条件下培养12小时，母种备用；

所述斜面培养基为LB培养基；

b.二级种子培养:将上述a所述的母种乳酸菌5种菌按照1%的接种量注入500ml液体培养基中，在37℃条件下厌氧静置培养48小时，得液态菌液；

将上述a所述的母种酵母菌3种菌分别用蒸馏水洗脱后均匀涂布到装有固体培养基的茄子瓶中，在28℃条件下静置培养24小时，得固态菌种，使用时用蒸馏水洗脱；

将上述a所述的母种芽孢菌6种菌分别用接种环接种到装有液体培养基的三角瓶中，在37℃条件下气浴摇床中震荡培养12小时，得液体菌液；

c.将上述b所得的菌种全部接种到装有750L培养基的1000L发酵罐中37℃培养先厌氧培养48小时，后耗氧培养24小时；

所述操作均在无菌环境中进行，培养基均进过高温灭菌冷却过程；

所述通气为通入经无菌过滤的洁净空气，通气量为每升培养基每分钟通气量为0.02L-0.5L，接种量为1%-5%。

5.根据权利要求4所述的制备方法中c所述的培养基，其特征在于：所述的培养基配方为：葡萄糖5%，乳清粉0.5%，硫酸铵0.4%，酵母膏0.4%，氯化钠1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.02%，鲜奶3%，消泡剂0.02%，其余为水；初始ph为7。

6. 权利要求1所述的混合发酵物饲料添加剂中固体发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于：乳酸菌类5种菌、酵母菌类3种菌、芽孢杆菌类6种菌在同一发酵罐中进行厌氧和耗氧培养；

包括以下步骤：

a.母种培育：同权利要求4；

b.二级种子培养：同权利要求4：

c.将上述b所得的菌液，乳酸菌接种到750L培养基的1000L乳酸菌发酵罐中，37℃培养厌氧培养48小时；酵母菌接种到750L培养基的1000L酵母菌发酵罐中，28℃培养耗氧培养24小时；芽孢菌接种到750L培养基的1000L芽孢菌发酵罐中，37℃培养耗氧、搅拌培养16小时；

所述操作均在无菌环境中进行，培养基均进过高温灭菌冷却过程；

所述通气为通入经无菌过滤的洁净空气，通气量为每升培养基每分钟通气量为0.02L-0.5L，接种量为1%-5%；

d.将上述c培养好的菌液按照1:1:1的转移到已空消灭菌后的3000L发酵罐中，混合均匀备用；

e.将上述d培养好的菌液按照5%-20%的比例接种到灭菌冷却后的固体培养基中，搅匀后用呼吸袋按照50kg/袋包装，密封后堆放到无菌室内发酵，发酵时间不小于7天，温度控制不低于28℃，不高于37℃。