[发明专利]牡丹营养器官内生细菌的分离纯化方法、培养基及其制备方法

权利要求书

1.牡丹营养器官内生细菌的分离纯化培养基，其特征在于：每1000mL培养基的组成为：金蝉干粉1.5~2.5g，酵母粉4~6g，吉兰糖胶1.5~2.5g，海藻糖0.2~1g，菊糖0.1~1g，NaCl 8~10g，牡丹根际土壤浸提液150~250mL，琼脂粉14~18g，余量为蒸馏水；金蝉干粉为金蝉老熟若虫经灭菌、干燥、破碎处理后得到的粉末。

2.根据权利要求1所述的牡丹营养器官内生细菌的分离纯化培养基，其特征在于：每1000mL培养基的组成为：金蝉干粉2g，酵母粉5g，吉兰糖胶2g，海藻糖0.5g，菊糖0.3g，NaCl9g，牡丹根际土壤浸提液200mL，琼脂粉16g，余量为蒸馏水。

3.根据权利要求1或2所述的牡丹营养器官内生细菌的分离纯化培养基，其特征在于：牡丹根际土壤浸提液为每500mL水中加入200~400g牡丹根际细土，经浸提制得。

4.牡丹营养器官内生细菌分离纯化培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将海藻糖0.2~1g、菊糖0.1~1g加入蒸馏水中，于98~105℃条件下高压蒸汽灭菌20~30min，静置，再于98~105℃条件下高压蒸汽灭菌20~30min，得溶液A备用；

2）将金蝉干粉1.5~2.5g、酵母粉4~6g、吉兰糖胶1.5~2.5g、NaCl 8~10g、琼脂粉14~18g和牡丹根际土壤浸提液150~250mL加入蒸馏水中，灭菌，得溶液B备用；金蝉干粉为金蝉老熟若虫经灭菌、干燥、破碎处理后得到的粉末；

3）将溶液A、溶液B混合后定容至1000mL，即得。

5.根据权利要求4所述的牡丹营养器官内生细菌分离纯化培养基的制备方法，其特征在于：牡丹根际土壤浸提液为每500mL水中加入200~400g牡丹根际细土，经浸提制得。

6.牡丹营养器官内生细菌的分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）取牡丹当年生健康营养器官，冲洗净，将非正常裸露的部位用融化的石蜡封口，再用无菌水冲洗；

2）转入65~75%乙醇溶液中表面消毒3~10min，再用0.05~0.15mol/L升汞消毒3~5min，无菌操作条件下将封口的石蜡剪去，剩余部分破碎处理后，静置沉淀，取上清液接种到如权利要求1~3中任一项所述的分离纯化培养基中，30~35℃条件下恒温培养2~3天；

3）挑取差异明显、特征典型的单菌落，分别进行划线纯化，每个单菌落连续划线纯化3次以上，得到不同单菌落的活体纯培养物。