[发明专利]一种CHRM3基因的小干扰RNA序列及其应用

说明书

本发明公开了一种CHRM3基因的小干扰RNA序列及其应用，该siRNA序列正义链为SEQ ID NO：2，反义链为SEQ ID NO：3，该siRNA能有效降低M3型mAChR蛋白表达，抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移能力，在抗肿瘤方面具有应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种CHRM3基因的小干扰RNA序列及其应用。

背景技术

恶性黑素瘤(malignant melanoma)是一类起源于神经嵴黑色素细胞的恶性肿瘤，该病恶性程度高，易转移，预后差，目前使用的外科手术、放疗、化疗等治疗手段效果不佳。选择特异有效的靶点，是治疗该病的关键。

毒蕈碱型胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor，mAChR)属于G蛋白偶联受体家族，是由460-590个氨基酸组成的7次跨膜糖蛋白，分子量为51-66kD。目前已经克隆出五种mAChR亚型(即M1-M5)。其中CHRM3基因是M3型mAChR的编码基因，虽然发现M3型mAChR在黑素瘤中有异常表达，但是由于缺少能作为特异性拮抗剂和或激动剂的化合物，该受体在黑素瘤增殖、侵袭转移等生物学过程中的作用和机制尚不明确。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的一种生物学现象，能特异干扰靶基因的表达。其作用机制是：核糖核酸酶III家族的Dicer酶，与dsRNA结合，将其剪切成21-23nt及3’端突出的小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)，随后siRNA与RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)结合，解旋成单链，活化的RISC受已成单链的siRNA引导，序列特异性地结合到靶信使RNA(mRNA)上并将其切断，引发靶mRNA的特异性分解，从而抑制相应基因表达。RNA干扰技术为病毒感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤等特异性治疗带来希望，是当前世界各国竞争的重要领域。曾有相关专利(例如US2011065778A1，US8076472B2，US2010099750A1等)公开了CHRM3基因的RNA干扰序列，但是相关序列针对的CHRM3基因编号为NM_000740.1，序列包含1773个碱基。最近CHRM3基因的更新编码为NM_000740.2，序列包含2757个碱基。因此碱基的变化将直接影响RNA干扰序列的设计、合成、甚至生物学功能评价。

发明内容

本发明的目的在于以最新的CHRM3基因序列为靶点，提供一种新的特异性抑制CHRM3基因表达的小干扰RNA序列及其应用。本发明涉及的CHRM3基因小干扰RNA序列能在基因转录后产生干扰作用，特异性降低M3型mAChR的蛋白表达，抑制黑素瘤增殖和侵袭，将来可能用于黑素瘤的治疗。

其具体技术方案为：

一种CHRM3基因的小干扰RNA序列，由下述正义链和反义链组成：

正义链：5’-CCUCGCCUUUGUUUCCAAATT-3’，如SEQ ID N0：2所示；

反义链：5’-UUUGGAAACAAAGGCGAGGTT-3’，如SEQID N0：3所示。

本发明所述CHRM3基因的小干扰RNA序列在抑制黑素瘤细胞增殖中的应用。

本发明所述CHRM3基因的小干扰RNA序列在降低黑素瘤细胞侵袭能力中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明获得的小干扰RNA序列未见于以往公开报道，能在CHRM3基因的转录后进行干扰，从而特异性降低M3型mAChR蛋白表达，抑制黑素瘤增殖和侵袭，将来可能用于黑素瘤的治疗。

附图说明