[发明专利]一种红豆杉根际多环芳烃降解菌的筛选方法及应用

说明书

本发明公开了一种红豆杉根际多环芳烃降解菌的筛选方法及应用，取2mL 100g/L活化土样加入到48mL 25mg/L芘溶液中，28℃振荡培养5d；取2mL富集液加入到48mL 50mg/L芘溶液，28℃振荡培养5d；循环往复，直到芘浓度为0.2g/L。经筛选驯化得到三株能高效降解多环芳烃的真菌：踝节菌，残孔菌和尖孢镰刀菌。在优化条件下，踝节菌对多种多环芳烃均能高效降解，尤其对芘的降解效果优于其它菌株。利用HPLC和质谱证实了踝节菌对多种多环芳烃的降解。从踝节菌和残孔菌提取的生物絮凝剂亦能降解芘，菲，萘，苊等多环芳烃。筛选得到的踝节菌属对高岭土的絮凝率达到90％。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种红豆杉根际多环芳烃降解菌的筛选方法及应用。

背景技术

多环芳烃(PAHs)是一类分子中含有两个以上苯环的有机化合物。这类物质化学性质稳定，毒副作用大，易对人类造成致畸性、致癌性和致突变性等危害。环境中多环芳烃的沉积主要来源于煤和石油的燃烧，工业生产、垃圾焚烧、汽车尾气排放等也会造成PAHs的大量增加。环境中PAHs数量多分布广，难以集中治理，用物理和化学修复方法难以将它们完全消除，还会对环境造成二次污染，生物修复技术能很好的解决上述问题。

我国有多种红豆杉属植物，其次生代谢产物紫杉醇具有抗癌功效。对红豆杉的药用价值研究很多。目前，红豆杉属植物内生菌种类及其次生代谢产物已成为研究热点。南方红豆杉是我国特有物种，其内生真菌种类丰富多样，李冬利等从南方红豆杉的叶、枝条、树皮及果实中共分离到内生真菌55株，通过形态学和分子生物学鉴定，发现其中4株菌可能为新种。宋培勇等从南方红豆杉的茎、皮和叶分离出52株细菌，用分子生物学方法确定其种属。郝大程等用克隆测序方法首次揭示南方红豆杉根际微生物多样性，但至今对其功能潜力所知甚少，从中分离出能降解多种PAHs的微生物具有重要的理论价值和工程实践意义，并有利于红豆杉资源的可持续综合利用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种红豆杉根际多环芳烃降解菌的筛选方法。该方法对红豆杉根际真菌进行驯化，筛选出以芘为唯一碳源的三个菌株，解决环境中多环芳烃的污染问题。操作简便易行，可直接应用于生产实践。

其具体技术方案为：

一种红豆杉根际多环芳烃降解菌的筛选方法，包括以下步骤：

取2ml 100g/L活化根际土样加入到48ml 25mg/L芘溶液中，28℃振荡培养5d；取2ml富集液加入到48ml 50mg/L芘溶液，28℃振荡培养5d；循环往复，直到芘浓度为0.2g/L；经过形态观察及rDNA-ITS序列分析鉴定出踝节菌属(Talaromyces verruculosus，T)，残孔菌属(Abortiporus biennis，R)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum，F)，踝节菌属和残孔菌属是用浓度为0.2g/L芘驯化筛选出的优势菌，尖孢镰刀菌不能耐受高浓度芘，只能在含50mg/L芘的平板上生长。将纯化的踝节菌属接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中，在30℃、150r/min的摇床中培养2d；取发酵液测絮凝率，经多次连续传代，踝节菌属的絮凝率均达到90％。

进一步，所述踝节菌属(简称T)于2014年11月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC No：M 2014542。

本发明所述踝节菌属在去除环境中PAHs污染物过程中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明不仅修复成本低、无二次污染，还可以大面积的应用到环境治理中，是去除环境中PAHs等污染物的重要而有效的途径。

保藏信息