[发明专利]一种烟草疫霉的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及一种烟草疫霉的培养方法。

背景技术

烟草黑胫病(tobacco black shank)是由烟草疫霉(Phytophtora nicotianae)引起的烟草生产中仅次于病毒病的第二大类病害。该病危害严重，广泛分布于温带、亚热带和热带地区。目前，防治该病最好的方法是筛选抗烟草黑胫病的烟草植株，而抗病植株的筛选需要经过抗性测定。

目前，在烟草黑胫病的抗性测定中常用的烟草疫霉接种体有菌丝块、菌丝液、游动孢子液、菌谷等。大田接种一般采用菌谷。所谓的菌谷是将平板培养得到的菌丝块直接接种到水稻培养基表面进行固体培养而获得的接种体。

在菌谷培养的过程中，由于平板培养与固体培养的基质成分差异大，将烟草疫霉菌丝从平板培养转接到固体培养时，菌丝通常需要2～3天的适应期，在适应期内菌丝不能很快占领基质而为其他杂菌提供了生长的机会，容易导致杂菌污染，培养失败。因此，如何快速有效地培养烟草疫霉是烟草黑胫病抗性测定中值得探索的技术问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明实施例公开了一种烟草疫霉的培养方法。技术方案如下：

一种烟草疫霉的培养方法，包括以下步骤：

1)、平板培养

将烟草疫霉菌株接种在麦粒滤液培养基上，26～28℃培养7～10天，获得平板培养的菌丝块；

2)、固体培养

将平板培养的菌丝块接种于麦粒培养基中，26～28℃培养7～10天，可得烟草疫霉的接种体，即菌谷；

其中，所述麦粒滤液培养基的制备方法为：将带壳麦粒用水浸泡8～12小时后纱网过滤，得到滤液和过滤后的带壳麦粒，向滤液中加入琼脂，灭菌处理，即可得到所述麦粒滤液培养基；所述带壳麦粒与水的体积比为1:(1～1.6)；所述琼脂在滤液中的加入量为(17～20)g/L；

所述麦粒培养基的制备方法：将过滤后的带壳麦粒与秸秆粒混匀，灭菌处理，制得所述麦粒培养基；所述过滤后的带壳麦粒与秸秆粒的体积比为(70～90):(10～30)。

在本发明的一种优选实施方式中，所述平板培养的菌丝块在所述麦粒培养基上的接种量为将5～10cm²表面积的菌丝块接种于100～200mL的麦粒培养基中。

在本发明的一种优选实施方式中，在平板培养之前，先进行活化培养，即将菌株接种在麦粒滤液培养基上，26～28℃培养2～3天，之后再在相同的培养条件下，继代培养1～2次。

在本发明的一种优选实施方式中，所述带壳麦粒为燕麦、黑麦、小麦中的一种或多种。

在本发明的一种优选实施方式中，所述秸秆粒为新鲜的的豌豆秸秆、蚕豆秸秆、玉米秸秆、甘蔗渣中的一种粉碎而成。

在本发明的一种更优选实施方式中，所述秸秆粒的粒径为3～5mm。

在本发明的一种更优选实施方式中，所述秸秆粒的含水量为50％～60％。

在本发明的一种优选实施方式中，所述麦粒与水的体积比为1:(1.2～1.4)。

在本发明的一种优选实施方式中，所述过滤后的带壳麦粒与秸秆粒的体积比为70:30。

本发明采用麦粒滤液和过滤后的带壳麦粒分别作为烟草疫霉菌株的培养基质，由于麦粒滤液和过滤后的带壳麦粒的成分相似，使得菌丝块在从麦粒滤液培养基转移到麦粒培养基培养时，迅速适应麦粒培养基的生长条件，不间断地生长，无适应期，快速均匀地占领基质，不给其他杂菌提供生长机会，减少污染，并且麦粒培养基由带壳麦粒和秸秆粒组成，间隙度和疏松度适合烟草疫霉的菌丝快速生长，比常规菌谷培养(GB/T 23224-2008烟草品种抗病性鉴定)缩短5～13天。而且本发明的烟草疫霉的培养方法，培养基配方简单，制作方便，成本低廉，适合工业化生产。

具体实施方式

在本发明的技术方案中，平板培养，通常是将菌株接种到培养皿中培养，因此本领域技术人员将其称为平板培养；固体培养，选用用水浸泡并过滤后的带壳麦粒和秸秆作为麦粒培养基，最后得到菌丝和麦粒培养基的混合物，本领域称其为菌谷。在烟草抗性测定中，用菌谷侵染烟草植株。本方法制备的菌谷可用于烟草黑胫病的人工接种物，或者用于制备带烟草黑胫病菌病土的添加物。