[发明专利]一种镉-IgE螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体地说，涉及一种镉-IgE螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

IgE主要由粘膜相关淋巴样组织产生，其中大部分是由胃肠淋巴样组织所合成，少部分由呼吸道、唾液腺和生殖道粘膜组织合成。哺乳期产妇腺组织含有大量IgE产生细胞，这些细胞主要来自胃肠。在人类，还有少量的IgE来自骨髓。人出生后4～6月开始合成IgE，4～12岁血清中含量达成人水平，血清型IgE总Ig的10％左右，半衰期约5～6天。IgE有IgE1和IgE2两个亚类。IgE1主要存在于血清中，约占血清中IgE的85％，α1链分子量为56kD；IgE2主要存在于外分泌液中，少部分以血清型IgE存在，约占血清中IgE的15％，α2链缺乏铰链区，分子量为52kD。血清中的IgE除单体形式外还有由J链共价相连的二聚体或三聚体等形式。分泌型IgE是由J连接的双体和分泌成分所组成，主要存在于初乳、唾液、泪液、胃肠液、支气管分泌等外分泌液中，是粘膜局部免疫的最重要因素，分泌型IgE通过与相应的病原微生物(如脊髓灰质炎病毒)结合，阻抑其吸附到易感细胞上，分泌型IgE还可中和毒素如霍乱弧菌毒素和大肠杆毒素等。新生儿易患呼吸道、胃肠道感染可能与IgE合成不足有关。慢性支气管炎发作与分泌型IgE的减少也有一定关系。产妇可通过初乳将分泌型IgE传递给婴儿，这也是一种重要的自然被动免疫。嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞表达FcαR,血清型单体IgE可介导调理吞噬和ADCC作用。此外，分泌型IgE具有免疫排除功能，即分泌型IgE结合饮食中大量的可溶性抗原以及肠道正常菌群或病原微生物所释放的热原物质，防止它们进入血液。

镉是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括电镀、制造工业颜料、塑料稳定剂、镍铬电池等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通过吸入镉污染的空气，及食用含镉污水灌溉农田生产的农作物(如含镉大米)等方式摄入镉。当然，吸烟也是慢性镉吸入的另一重要来源。随着经济的飞速发展，镉污染对于人类的影响越来越大。通过研究镉对小鼠子代体液免疫的影响发现了染镉21天仔鼠的血清溶血素滴度明显低于对照组；4周龄时高镉组、低镉组、对照组仔鼠间血清溶血素滴度没有显著差异；8周龄时,低镉组仔鼠血清溶血素滴度与对照组相比明显升高,表现出刺激作用,而高镉组却与对照组无显著差异,表现免疫反应受到抑制。镉对子代小鼠的免疫影响是在尚未发生母体中毒作用的情况下产生的,对仔鼠的生长发育也未见明显影响。可见发育中的免疫系统对镉较敏感,提示可考虑将子代免疫指标作为研究镉的发育毒性作用的指标之一。

镉与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白酶的活性。随着对镉毒性研究的深入，人们逐渐认识到镉与蛋白的相互作用在其致毒过程中扮演着重要的角色，被认为是了解镉的毒性机理的关键所在，因此，对镉和蛋白质相互作用的研究就显得愈发重要。而现在关于镉与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋白质与镉之间的关系还不清楚，因而加强对于镉与蛋白质之间的关系至关重要。

发明内容

针对镉污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种镉-IgE螯合物及其制备方法，并建立镉-IgE螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测镉-IgE螯合物在评价一个地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镉-IgE螯合物可以间接反映这个地区人群受镉污染的情况，从而间接反映这个地区镉污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种镉-IgE螯合物，镉离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的镉-IgE螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A)镉与IgE的螯合反应：在提纯源于人体的IgE或按照生物学方法重组的IgE中加入镉离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化镉-IgE螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgE以及多余的镉离子，即得镉-IgE螯合物。

其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下：

(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水使镉-IgE螯合物复溶；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgE特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgE与填料特异性结合；