[发明专利]一种镉‑IgG螯合物及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201510412222.9 | 申请日： | 2015-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN104987407B | 公开（公告）日： | 2018-01-05 |
| 发明（设计）人： | 张积仁;阳帆;董欣敏;吴婧;蔡睿;孙遥;赵乙木 | 申请（专利权）人： | 上海拜豪生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;G01N33/68;G01N33/96 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)44288 | 代理人： | 汤喜友 |
| 地址： | 200000 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 igg 螯合物 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种镉-IgG螯合物在制备检测血样中镉-IgG螯合物的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述镉-IgG螯合物为镉离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成；
该镉-IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：
A)镉与IgG的螯合反应：在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入镉离子进行螯合反应，得到反应溶液；
B)纯化镉-IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的镉离子，即得镉-IgG螯合物；
C)对镉-IgG螯合物的鉴定；
其中，步骤B)具体如下：
(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使镉-IgG螯合物复溶；
(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；
(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；
(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；
(5)收集：收集经过步骤(4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；
(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与镉特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；
(8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；
(9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；
(10)收集：收集经过步骤(9)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
(11)透析：将步骤(10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得镉-IgG螯合物；
其中，步骤C)中具体如下：
(1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；
(2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的镉-IgG螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；
(3)电泳：连接电泳板，进行电泳；
(4)检测：在胶床上找出含镉的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带复溶，然后再采用ICP-MS法、AAS法或ELISA法检测是否含有镉以及检测镉的含量。
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