[发明专利]一种汞‑IgG螯合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种汞-IgG螯合物，汞离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成；

该汞-IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A）汞与IgG的螯合反应：在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入汞离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B）汞-IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的汞离子，即得汞-IgG螯合物；

所述步骤B）具体如下：

（1）溶解样品：向经过步骤A）得到的反应溶液中加入生理盐水，使汞-IgG螯合物复溶；

（2）平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

（3）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1）中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；

（4）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；

（5）收集：收集经过步骤（4）洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；

（6）透析：将步骤（5）中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；

（7）平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与汞特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；

（8）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（6）中样本，然后上柱；

（9）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；

（10）收集：收集经过步骤（9）洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；

（11）透析：将步骤（10）中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得汞-IgG螯合物。

2.根据权利要求1所述的汞-IgG螯合物，其特征在于，其制备方法步骤B）之后还包括步骤C）：对汞-IgG螯合物的鉴定；

其中，步骤C）中具体如下：

（1）制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；

（2）加样：取步骤B）中纯化得到的汞-IgG螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；

（3）电泳：连接电泳板，进行电泳；

（4）检测：在胶床上找出含汞的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带复溶，然后再采用ICP-MS法、AAS法或ELISA法检测是否含有汞以及检测汞的含量。

3.一种如权利要求1所述的汞-IgG螯合物在制备检测血样中汞-IgG螯合物的试剂或试剂盒中的应用。

4.一种至少包括如权利要求1所述的汞-IgG螯合物作为标准品的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括包被液，该包被液含有可捕获IgG的蛋白或可捕获金属汞的物质。

6.一种定量检测汞-IgG螯合物的方法，其特征在于，以已知含量的权利要求1所述的汞-IgG螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯汞-IgG螯合物与酶联免疫结合法、提纯汞-IgG螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯汞-IgG螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。