[发明专利]砷-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，具体涉及砷-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

脂蛋白(lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复合物，按密度分为高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)、乳糜颗粒(chylomiAson，CM)。在血液中约70％的胆固醇由LDL和VLDL所携带，而LDL所携带的胆固醇含量大于VLDL，由于LDL富含胆固醇，因而被称为“坏胆固醇”，其与多种疾病的发生、发展密切相关，特别是冠心病，糖尿病等疾病，研究发现“坏胆固醇”还可促进癌症细胞的发展和转移。

LDL是动脉粥样硬化发生和发展的主要危险因素，其改变在血清蛋白中对动脉粥样硬化有很强的影响作用，是冠状动脉疾病的重要危险因子，与心血管疾病危险程度呈正相关。因而定量检测血清中LDL对于心血管疾病具有重要意义，不仅可以用于早期识别动脉粥样硬化的危险性，而且可以作为降脂药物治疗过程的检测以及预后评价的指标之一。此外，肾病综合征、慢性肾功能衰竭、肝病及糖尿病等，也可使血清中LDL含量上升，而定量检测LDL也可用于这些疾病的早期诊断以及治疗效果监测，甚至作为预后好坏的评价指标之一。而对于营养不良、慢性贫血、骨髓瘤、急性心肌梗死、创伤和严重肝病等患者，血清LDL的含量将会下降，定量检测LDL也可用于这些疾病的早期诊断、治疗效果监测以及作为预后评价的指标之一。

砷是常见的环境毒物之一，广泛存在于水、土壤、空气以及食物之中砷能对人体产生急性或慢性毒性，急性砷中毒会导致呕吐、口干、肌肉痉挛、腹痛、手脚刺痛等剧烈症状，而慢性砷中毒对人类健康的影响也已成为人们关注的一个重大问题。通过饮用水和空气是两种与环境中砷接触最直接的方式，它会诱发心血管疾病、引起神经功能失调、并导致糖尿病以及肺癌、皮肺癌、膀胱癌等。而目前流行病学显示，在自然界存在的砷引起的地下饮用水污染，已在多个国家和地区造成高剂量的砷暴露，成为环境污染和危害健康的全球性问题。

目前已有大量的文献证实砷可以作用于全身各个系统中的蛋白，从而影响机体各组织器官的机能。众所周知，低密度脂蛋白是一种特殊意义的蛋白质，砷是否可以作用于低密度脂蛋白，而使低密度脂蛋白结构改变、含量改变、活性改变、功能改变，这些尚缺乏相关研究。

发明内容

针对砷污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种砷-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法，并建立砷-低密度脂蛋白螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测砷-低密度脂蛋白螯合物在评价一个地区砷污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中砷-低密度脂蛋白螯合物可以间接反映这个地区人群受砷污染的情况，从而间接反映这个地区砷污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种砷-低密度脂蛋白螯合物，该砷-低密度脂蛋白螯合物是砷离子与低密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的砷-低密度脂蛋白螯合物的制备方法，即体外合成法，包括以下步骤：

A)砷-低密度脂蛋白螯合物的合成：在提纯源于人体的低密度脂蛋白或按照生物学方法重组的低密度脂蛋白中加入砷离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)砷-低密度脂蛋白螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中未反应的低密度脂蛋白、特异性抗体和砷离子，即得砷-低密度脂蛋白螯合物。

作为优选，所述步骤B)中具体包括以下步骤：

(1)溶解样品：将上述步骤A)的提取的砷-低密度脂蛋白螯合物溶解于生理盐水中，得砷-低密度脂蛋白螯合物的溶液；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与低密度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

所述能与低密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与低密度脂蛋白特异性结合物质的硅胶或树脂；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)的溶液，然后上柱，使低密度脂蛋白与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.10mol/L的Na₂HPO₄溶液进行洗脱；